Hoechst 33258染色原理

Hoechst 33258 是一種細(xì)胞滲透性苯并咪唑染料，可與雙鏈 DNA 的小溝結(jié)合，優(yōu)先與富含腺嘌呤和胸腺嘧啶的序列結(jié)合。 當(dāng)與活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的 DNA 結(jié)合時(shí)，它會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光（激發(fā) 352 nm/最大發(fā)射波長 461 nm），可用作細(xì)胞周期研究的細(xì)胞核標(biāo)記物和區(qū)分凋亡細(xì)胞中的細(xì)胞核形態(tài)。

二、Hoechst 33258染色實(shí)驗(yàn)所需溶液的配制：
(1)Hoechst 33258儲(chǔ)備液
Hoechst 33258 1mg
0．01mol／L的PBS(pH 7．4) 5ml
(2)Hoechst 33258工作液(終濃度為0．5μg／ml)
Hoechst 33258濃縮液 125μl
0．01mol／L的PBS(pH 7．4) 50ml

三、Hoechst 33258染色實(shí)驗(yàn)操作步驟
(1)細(xì)胞懸液或培養(yǎng)單層細(xì)胞等標(biāo)本，用醋酸―乙醇或Carnoy固定液固定；
(2)0．01mol／L的PBS漂洗5分鐘；
(3)Hoechst 33258工作液染色，室溫放置15分鐘左右；
(4)0．01mol／L的PBS漂洗3次，每次漂洗5分鐘左右；
(5)用甘油與PBS比例為1：9的混合液或水溶性封片劑封片，熒光顯微鏡觀察。
結(jié)果：該染料為DNA的特異性熒光探針，細(xì)胞核呈亮藍(lán)色熒光。