前言：

顯色底物用于比色檢測。它們簡單易用。適用于大多數(shù)免疫技術(shù)——從免疫組織化學(xué)到蛋白質(zhì)印跡和?ELISA，它們提供了一種J具成本效益的檢測方法。

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這期的主題是Jackson ImmunoResearch公司為大家講解：Western Blot、IHC?和?ELISA?的顯色檢測。

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顯色底物可用于許多免疫組織化學(xué)應(yīng)用，從?IHC?染色組織到蛋白質(zhì)印跡。將顯色底物添加到先前與酶偶聯(lián)抗體（通常是辣根過氧化物酶?(HRP)?或堿性磷酸酶?(AP)）孵育的印跡或組織中，將底物轉(zhuǎn)化為有色沉淀物。通過簡單地洗掉基板來阻止信號發(fā)展。沉淀物肉眼可見，在蛋白質(zhì)印跡上，無需特殊設(shè)備即可檢測為彩色條帶。用于免疫組化?(IHC)?時，在正常光學(xué)顯微鏡下可以在組織上看到顯色沉淀。

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圖?1：間接比色檢測。A.?報告酶偶聯(lián)二抗可檢測目的蛋白的一抗。B.?將顯色底物添加到抗體-抗原復(fù)合物中。C.?報道酶偶聯(lián)物催化顯色底物轉(zhuǎn)化為有色不溶性沉淀物，在印跡膜上肉眼可見。

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一、Jackson：溶解度

顯色試劑可用于不同的報告酶、HRP、AP、GOD（葡萄糖氧化酶）和 β-Gal（β 半乳糖苷酶）?；挠胁煌念伾挽`敏度。根據(jù)測定，可以選擇可溶性或不溶性底物。

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不溶于醇的色原適用于使用復(fù)染劑或封固劑的蛋白質(zhì)印跡和?IHC?？扇苄匀玖细m合?ELISA?和基于板的測定。

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二、Jackson公司：Western印跡和斑點印跡

當(dāng)用于蛋白質(zhì)印跡或斑點印跡時，顯色底物在膜上固定抗原抗體復(fù)合物的位置顯示為彩色條帶或斑點（圖?2?和?3）。印跡可以顯影，直到條帶的信號達到所需的強度，這允許良好的靈敏度水平，因為可以直接觀察印跡的發(fā)展，并且通過洗去底物立即停止反應(yīng)。然后可以對顯影的膜進行成像或存儲以供后續(xù)使用。樣品濃度低（低抗原）的樣品可能需要延長顯影時間，這可能導(dǎo)致背景較高、條帶模糊。

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三、Jackson公司：酶聯(lián)免疫吸附試驗

比色?ELISA?測量可溶性有色產(chǎn)品的光密度，該光密度通常與樣品中存在的分析物的量成正比，從而可以對分析物進行相對定量。與其他免疫技術(shù)一樣，ELISA?需要優(yōu)化時間和開發(fā)條件，以獲得準(zhǔn)確且可重復(fù)的測定。（圖4）

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四、Jackson公司：免疫組織化學(xué)

比色檢測對于組織和細胞的免疫染色來說是一種非常靈敏的方法。不同的底物提供不同的靈敏度和顏色以幫助識別，多種抗原識別是可能的，因為顏色可以與一種底物和另一種底物區(qū)分開來。有許多復(fù)染劑可用，可用于增加對比度，使?IHC?染色看起來更強。圖?5?顯示了3,3'?二氨基聯(lián)苯胺（?DAB?染色）與細胞核的蘇木精復(fù)染的棕色。

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五、Jackson公司：報告酶（與抗體偶聯(lián)）

J常見的偶聯(lián)報告酶是來自辣根植物Armoracia rusticana的辣根過氧化物酶?(HRP)和來自小牛腸的堿性磷酸酶?(AP)，盡管來自大腸桿菌的葡萄糖氧化酶?(GOD)?和??-D-半乳糖苷酶也可以使用。HRP?和?AP?都根據(jù)應(yīng)用要求提供不同的優(yōu)勢。HRP?是一種?40 kDa?的小分子，通常以?4:1?的比例與抗體結(jié)合。它的小尺寸意味著良好的細胞內(nèi)滲透性，并且不太可能引起抗原/抗體復(fù)合物的空間位阻。AP?稍大（86 kDa），可能會導(dǎo)致空間干擾，但底物轉(zhuǎn)化反應(yīng)是線性的，這可能意味著檢測孵育時間可以延長，并且可能更敏感。AP?還消除了對具有高水平內(nèi)源性過氧化物酶（HRP?中的一個限制因素）的組織進行非特異性染色的可能性。

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。