前言：

熒光團是科學研究的重要工具。它們廣泛用于免疫測定技術(shù)，例如流式細胞術(shù)、免疫組織化學?(IHC)?和熒光顯微鏡，其中熒光團偶聯(lián)的二抗可提供目標分析物的可視化。與比色或化學發(fā)光檢測相比，熒光檢測的主要優(yōu)勢在于它可以實現(xiàn)多路復用。無論您是使用熒光標記的二抗來單獨顯示單個靶標，還是進行復雜的多色研究，在熒光團選擇過程中都需要牢記幾個重要因素。

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這期的主題是Jackson ImmunoResearch公司為大家講解：為基于抗體的研究選擇熒光團。

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一、Jackson：什么是熒光團？

熒光團是吸收特定波長范圍內(nèi)的光（激發(fā)）并在另一個更長的波長范圍內(nèi)發(fā)射（發(fā)射）的分子。激發(fā)和發(fā)射發(fā)生的波長范圍稱為激發(fā)和發(fā)射光譜。對于每個熒光團，都有一個最佳波長，在該波長處熒光團被最有效地激發(fā)（激發(fā)最大值）。同樣，對于任何特定的激發(fā)最大值，發(fā)射光譜具有熒光信號最強的波長（發(fā)射最大值）。激發(fā)和發(fā)射過程是循環(huán)的，僅在熒光團受損（光漂白）時結(jié)束。這種損壞通常是由于長時間暴露于激發(fā)光源造成的。

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二、Jackson公司：熒光團如何用于科學研究？

熒光團用于許多研究應(yīng)用，最常用于免疫測定技術(shù)，例如流式細胞術(shù)、免疫組織化學?(IHC)、蛋白質(zhì)印跡、熒光?ELISA (FLISA)?和免疫細胞化學?(ICC)。在這里，熒光團共軛二抗用于結(jié)合識別目標分析物的目標特異性一抗。使用標記的多克隆二抗的主要優(yōu)點是它們提供信號放大，因為多個二抗可以結(jié)合每個一抗。標記的二抗還為研究人員在實驗設(shè)計中提供了高度的靈活性，因為廣泛的二抗-熒光團偶聯(lián)物很容易獲得。

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三、Jackson公司：有哪些典型的熒光團？

研究人員可以使用許多不同的熒光團，并且隨著新染料的開發(fā)，選項列表繼續(xù)增加。Alexa Fluor?、DyLight? 和?Cy? 以及最近可用的熒光團如Brilliant Violet? 染料。此外，熒光蛋白?R-藻紅蛋白?(R-PE)、別藻藍蛋白?(APC)?和?Peridinin-葉綠素蛋白?(PerCP)?也可用于流式細胞術(shù)等特定應(yīng)用。后者受益于J高的亮度和離散的激發(fā)和發(fā)射光譜。一些較新的熒光團旨在填補現(xiàn)有染料之間的光譜間隙，以便研究人員可以構(gòu)建更大的多路復用面板。

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四、Jackson公司：在熒光團選擇過程中哪些特征很重要？

為科學研究選擇熒光團時的主要考慮因素是面板設(shè)計。由于熒光團標記的二抗主要用于多重實驗，因此選擇彼此兼容的熒光團以及與檢測和分析它們的儀器兼容是至關(guān)重要的。

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建議使用明亮的熒光團（例如?PE、Alexa Fluor? 488）來檢測弱表達的目標，而不太明亮的熒光團（例如?FITC）與更豐富的分析物配對。通過考慮每個熒光團的激發(fā)和發(fā)射光譜，最大限度地減少光譜重疊并避免背景干擾也很重要。另一個明智的策略是確認當多個熒光團標記的二抗組合時產(chǎn)生的染色與單抗體染色相匹配；這將排除因不同抗體混合在一起而產(chǎn)生的任何交叉反應(yīng)或阻斷效應(yīng)。理想情況下，在開始多次染色實驗之前，應(yīng)包括使用單個熒光團偶聯(lián)物的適當控制。

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要記住的另一個重要因素是所有熒光團都應(yīng)妥善儲存，遠離光線。過期試劑應(yīng)與較新試劑一起測試，以確保亮度沒有受到影響。一些熒光團可能對常見的固定和通透緩沖液敏感，突出了對實驗進行仔細優(yōu)化的必要性。最后，某些熒光團可能與某些細胞類型或結(jié)構(gòu)非特異性結(jié)合。盡管可以使用封閉緩沖液來防止這種情況，但重要的是要檢查它們是否可以與同一面板中的其他熒光團一起使用。

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Jackson公司專注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)領(lǐng)域覆蓋各大學科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學研究機構(gòu)的科學家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。