ceRNA機(jī)制基礎(chǔ)研究過(guò)時(shí)了？答案是No!稍微小心思就可以將ceRNA機(jī)制做出花樣，帶來(lái)高分驚喜。下面小編就跟大家分享一篇基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的文章，這篇文章的題目是m6A-induced LINC00958 promotes breast cancer tumorigenesis via the miR-378a-3p/YY1 axis，于2021年發(fā)表在Cell Death Discovery上，雜志的影響因子為5.241。

這篇文章將m6A修飾與ceRNA機(jī)制結(jié)合，思路簡(jiǎn)單，下面就具體來(lái)看下文章的主要結(jié)果吧。

1、LncRNA LINCO0958提示乳腺癌患者預(yù)后不良

在入組的乳腺癌患者中，檢測(cè)到LINC00958的表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)其表達(dá)顯著上調(diào)（圖1A）。將這些樣本按臨床分期分為兩組，結(jié)果顯示LINC00958在晚期（III-IV級(jí)）的表達(dá)高于早期（I-II級(jí)）（圖1B）。在臨床樣本的基礎(chǔ)上，本研究還檢測(cè)了乳腺癌細(xì)胞系中LINC00958的水平。研究發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞相比，LINCO0958在乳腺癌細(xì)胞中顯著上調(diào)（圖1C）。生存分析發(fā)現(xiàn)，LINC00958表達(dá)水平較高提示乳腺癌患者預(yù)后不良（圖1D）。

2、m6A誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞中LINCO0958表達(dá)上調(diào)

在MeRIP-Seq分析中，在LINC00958位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)顯著的m6A修飾位點(diǎn)（圖2A）。已有的報(bào)道發(fā)現(xiàn)，m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3可能會(huì)LINC00958進(jìn)行m6A修飾，因此我們假設(shè)METTL3可以促進(jìn)LINC00958的m6A修飾。在乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7）中，METTL3的表達(dá)上調(diào)（圖2B）。使用METTL3敲低（圖2C）轉(zhuǎn)染，m6A定量分析顯示，METTL3沉默降低了m6A修飾富集（圖2D）。MeRIP-qPCR顯示，m6A修飾的LINC00958在METTL3沉默后表達(dá)水平下降（圖2E）。RNA穩(wěn)定性分析顯示，METTL3沉默可降低LINC00958水平，說(shuō)明METTL3在乳腺癌細(xì)胞中LINCO0958過(guò)表達(dá)中的作用（圖2F）。綜上所述，m6A誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞LINC00958表達(dá)上調(diào)。

3、LINCO0958促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的腫瘤進(jìn)展

通過(guò)功能增加或喪失檢測(cè)LINC00958在MCF-7細(xì)胞表型中的作用（圖3A）。集落形成實(shí)驗(yàn)（圖3B、C）和CCK-8實(shí)驗(yàn)（圖3D）表明，LINC00958敲低可抑制MCF-7細(xì)胞的增殖，LINC00958過(guò)表達(dá)可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡發(fā)現(xiàn)，LINC00958敲低可加速MCF-7細(xì)胞的凋亡，LINC00958過(guò)表達(dá)可降低細(xì)胞的凋亡（圖3E）。體內(nèi)注射了用LINC00958敲低轉(zhuǎn)染的MCF-7細(xì)胞的小鼠顯示出對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的顯著抑制（圖3F）。這些結(jié)果提示，LINC00958促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的腫瘤進(jìn)展。

4、LINCO0958靶向miR-378a-3p

在LINC00958的功能研究中，本研究通過(guò)亞細(xì)胞分?jǐn)?shù)分析發(fā)現(xiàn)LINC00958主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，而不是細(xì)胞核中（圖4A）。使用生物信息學(xué)預(yù)測(cè)工具（StarBase），發(fā)現(xiàn)幾種miRNAs可能受到LINC00958的調(diào)控。在這些miRNAs中，miR-378a-3p與LINC00958有顯著的連接(圖4B)。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-378a-3p mimic可以直接與LINC00958結(jié)合（圖4C）。RT-PCR顯示，與正常細(xì)胞（MCF-10A）相比，miR-378a-3p在乳腺癌細(xì)胞（MCF-7）中的表達(dá)下降（圖4D）。在MCF-7細(xì)胞中，LINC00958敲低轉(zhuǎn)染后miR-378a-3p表達(dá)上調(diào)（圖4E）。這些數(shù)據(jù)支持LINC00958在乳腺癌細(xì)胞中靶向miR-378a-3p。

5、LINC00958/miR-378a-3p靶向YY1

生物信息學(xué)預(yù)測(cè)工具（StarBase）發(fā)現(xiàn)LINCO0958/miR-378a3p可以靶向多種蛋白（圖5A）。發(fā)現(xiàn)YY1是LINCO0958/miR-378a-3p的靶點(diǎn)，構(gòu)建了熒光素酶報(bào)告載體（野生型和突變型）（圖5B）。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-378a-3p mimics與野生型YY1 mRNA緊密結(jié)合（圖5C）。RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)miR-378a-3p mimics轉(zhuǎn)染降低了YY1 mRNA的表達(dá)，并且miR-378a-3p抑制劑上調(diào)YY1 mRNA的表達(dá)。此外，LINCO0958基因的下調(diào)降低了YY1 mRNA的表達(dá)，而LINC00958過(guò)表達(dá)則促進(jìn)了YY1 mRNA的表達(dá)（圖5D）。在MCF-7細(xì)胞中，YY1 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)（圖5E）。Pearson's相關(guān)分析顯示，在乳腺癌樣本中，miR378a-3p與YY1呈負(fù)相關(guān)，LINC00958與YY1呈正相關(guān)（圖5F）。這些數(shù)據(jù)支持LINC00958/miR-378a-3p靶向YY1。

以上就是本研究的主要結(jié)果啦，實(shí)驗(yàn)方法比較常規(guī)。本文的創(chuàng)新點(diǎn)在于將m6A修飾與ceRNA調(diào)控機(jī)制簡(jiǎn)單結(jié)合揭示乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，大家趕緊借鑒起來(lái)，注入熱點(diǎn)思路提亮文章吧。

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