WP1066, JAK/STAT3 inhibitor 是一種細(xì)胞滲透性 STAT3 抑制劑，當(dāng)以 10 μM 的濃度給藥時，WP1066 可指導(dǎo) U87-MG 和 U373-MG 惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中組成型磷酸化 STAT3 的去磷酸化和核輸出。WP1066 還誘導(dǎo) U87-MG 細(xì)胞凋亡（IC50 = 5.6 μM) 和 U373-MG (IC50 = 3.7 μM) 細(xì)胞。WP1066 具有口服生物利用度，可穿過血腦屏障，并表現(xiàn)出體內(nèi)活性，包括 CD80 和 CD86 上調(diào)所示的免疫激活和 誘導(dǎo)效應(yīng) T 細(xì)胞增殖。WP1066 除了誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡外，WP1066 還能抑制小鼠血管損傷后的血管平滑肌細(xì)胞增殖，并防止大鼠腦損傷后的癲癇發(fā)作。

體外研究

WP1066 能顯著抑制攜帶JAK2 V617F突變亞型的HEL細(xì)胞的生長，這種抑制是劑量依賴型的，它的IC20, IC50和 IC80分別是0.8, 2.3 和3.8 μM。在表達(dá)JAK2 V617F突變亞型的急性白血病HEL細(xì)胞中0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 或 4.0 μM濃度的WP1066則可以抑制JAK2, STAT3, STAT5和ERK1/2的磷酸化，但不會抑制JAK1 和JAK3的磷酸化。[1] WP1066的濃度在0.5 到 3.0 μM之間以劑量依賴的方式抑制從病人體內(nèi)獲得的AML形細(xì)胞以及AML 細(xì)胞系 OCIM2和K562的增殖。在OCIM2 和K562細(xì)胞中，WP1066濃度在0.5, 1.0, 2.0, 3.0或 4.0 μM時，劑量依賴地降低JAK2 和pJAK2的蛋白水平，同時STAT3, STAT5和AKT的磷酸化水平。2 μM濃度的WP1066可以通過誘導(dǎo)處在細(xì)胞周期G0-G1期細(xì)胞的積累抑制OCIM2細(xì)胞增加。1, 2或 3 μM的WP1066能激活procaspase-3，裂開的PARP，劑量依賴地引起OCIM2 和K562細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。[3] 5 μM濃度的WP1066能阻止STAT3磷酸化，2.5μM濃度時能顯著抑制Caki-1和 786-O腎癌細(xì)胞的生存和增殖。5 μM WP1066還能抑制Caki-1和 786-O腎癌細(xì)胞中HIF1α 和 HIF2α的表達(dá)及VEGF的產(chǎn)生。[4]

體內(nèi)研究

每日口服40 mg/kg劑量的WP1066，連續(xù)服用19天，能顯著抑制Caki-1移植小鼠的腫瘤生長，同時磷酸化的STAT3免疫染色減少，CD34陽性 血管長度降低。 [4]

細(xì)胞實驗

Cell lines: 攜帶JAK2 V617F突變亞型的HEL細(xì)胞系 , HL60, K562, Raji, PEER, CMK, TM 和RHN 細(xì)胞系
Concentrations: 0 - 6 μM
Incubation Time: 72 小時

實驗方法:
利用基于MTT的細(xì)胞增殖/細(xì)胞毒性分析系統(tǒng)進(jìn)行MTT檢測。簡單的說就是將對數(shù)生長期的新鮮的低密度外周血細(xì)胞核不同的細(xì)胞系用含有10% FCS的RPMI 1640洗兩次，再進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)。用臺盼藍(lán)(0.1%)染色方法估算細(xì)胞的存活性。在96孔板中取相等數(shù)量的存活細(xì)胞(5 × 104 每孔)用含10% FCS的RPMI 1640培養(yǎng)基將體系稀釋到100 μL，不加或加入依次增加濃度的WP1066，在含5% CO2的空氣和37℃的培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)72小時。每個條件下的實驗都做三組對照。之后每孔加入20 μL CellTiter96 One Solution Reagent。然后在37℃，5% CO2中繼續(xù)孵育60分鐘。孵育后立即用酶標(biāo)儀檢測490 nm波長的吸光度。