一.百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒概述 在進行各種分析的DNA樣品制備中，DNA定量是一項非常重要的任務。 Portelite 熒光DNA定量試劑盒提供了使用Qubit熒光儀操作Helixyte Green BR快速定量dsDNA的方法。它針對Cytocite 和Qubit 熒光儀進行了優(yōu)化。 Portelite 熒光DNA定量測定在三個數(shù)量級上呈線性。該測定法對RNA上的雙鏈DNA（dsDNA）具有高度選擇性，并針對測量10 pg / μL至10 ng / μL的dsDNA濃度進行了優(yōu)化。Helixyte Green-BR與dsDNA結合后表現(xiàn)出較大的熒光增強，并且比UV吸光度讀數(shù)高幾個數(shù)量級。 ? 二.百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒適用儀器 ? 量子位熒光計 Ex:???????480nm Em:???????530nm 規(guī)格:?????0.2mLPCR小瓶 ? CytoCite熒光計 Ex:???????480nm Em:???????530nm 規(guī)格:?????0.2mLPCR小瓶 ? 三.百螢 Portelite 熒光法DNA定量試劑盒實驗方案 ?

簡要概述

1.?準備Helixyte Green BR工作溶液

2.?在每個0.2 mL PCR管中加入190 uL 1X Helixyte Green BR工作溶液

3.?在每個試管中添加10 uL DNA標準溶液或測試樣品

4.?在室溫下孵育2分鐘

5.?使用CytoCite 熒光儀或Qubit 檢測熒光

注意：

打開之前，請將所有成分置于室溫下。

?

溶液配制

工作溶液配制

Helixyte Green-BR工作溶液：

在DNA分析緩沖液（組分B）中稀釋200倍Portelite dsDNA試劑（組分A）。 例如，要為8個樣品準備足夠的工作溶液，請將5uL Helixyte Green BR（組分A）添加到1mL DNA分析緩沖液（組分B）

中。注意：通過用箔紙覆蓋或將其置于黑暗中來保護工作液免受光照。 我們建議在塑料容器中操作而不是玻璃中制備該溶液，因為染料可能會吸附到玻璃表面。 為了獲得佳結果，應在準備后的幾個小時內使用此溶液。

?

實驗步驟

根據(jù)DNA樣品的估計濃度，樣品量可以在1?20 uL的范圍內。推薦的樣品量為10 uL，DNA濃度在0.2?100 ng / uL范圍內。如果使用其他樣品體積，請在濃度計算中調整稀釋倍數(shù)。

10 uL樣品體積（DNA濃度在0.2?100 ng / uL范圍內）實驗方案。

1.?在每個Cytocite 樣品管（＃CCT100）或等效的0.2 mL PCR管中添加190 uL 1X Helixyte Green BR工作溶液。注意：請使用薄壁聚丙烯透明0.2 mL PCR管，例如＃CCT100。

2.?向每個試管中加入10 μL DNA標準品或測試樣品，然后離心2?3秒進行混合。

3.?將所有試管在室溫下孵育2分鐘。

4.?將樣品插入CytoCite 或Quibit?中，并通過綠色熒光通道檢測熒光。若使用CytoCite，請遵循適用于CytoCite 熒光儀的程序。

標準校準曲線的準備

對于Portelite 分析，您可以選擇使用DNA標準液繪制校正曲線。

1.?在DNA分析緩沖液（成分B）中，用100 ng/uL的DNA標準BR#2（成分D）進行1/3系列稀釋，得到30、10、3、1、0.3、0.1和0 ng/uL的DNA標準稀釋液。

2.?在每個試管中加入190 uL Helixyte Green BR工作溶液。

3.?將10 uL標準液或10 uL樣品添加到0.2 mL PCR管中。

4.?將反應在室溫下孵育2分鐘。

5.?將樣品插入CytoCite ，并通過綠色熒光通道檢測熒光。