層析法的分類
?層析根據(jù)不同的標(biāo)準(zhǔn)可以分為多種類型:
1. 根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類,層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析。薄層層析是將基質(zhì)在玻璃或塑料等光滑表面鋪成一薄層,在薄層上進(jìn)行層析。柱層析則是指將基質(zhì)填裝在管中形成柱形,在柱中進(jìn)行層析。紙層析和薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測分析和少量分離制備,通常為一次性使用,而柱層析是常用的層析形式,適用于樣品分析、分離。生物化學(xué)中常用的凝膠層析、離子交換層析、親和層析、高效液相色譜等都通常采用柱層析形式。
2. 根據(jù)流動相的形式分類,層析可以分為液相層析和氣相層析。氣相層析是指流動相為氣體的層析,而液相層析指流動相為液體的層析。氣相層析測定樣品時需要氣化,大大限制了其在生化領(lǐng)域的應(yīng)用,主要用于氨基酸、核酸、糖類、脂肪酸等小分子的分析鑒定。而液相層析是生物領(lǐng)域最常用的層析形式,適于生物樣品的分析、分離。
3. 根據(jù)分離的原理不同分類,層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。
吸附層析是以吸附劑為固定相,根據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)。
分配層析是根據(jù)在一個有兩相同時存在的溶劑系統(tǒng)中,不同物質(zhì)的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)。
凝膠過濾層析是以具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠顆粒作為固定相,根據(jù)物質(zhì)的分子大小進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。
離子交換層析是以離子交換劑為固定相,根據(jù)物質(zhì)的帶電性質(zhì)不同而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。
親和層析是根據(jù)生物大分子和配體之間的特異性親和力(如酶和抑制劑、抗體和抗原、激素和受體等),將某種配體連接在載體上作為固定相,而對能與配體特異性結(jié)合的生物大分子進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。親和層析是分離生物大分子最為有效的層析技術(shù),具有很高分辨率。