層析的基本理論
? 層析法是一種基于被分離物質(zhì)的物理、化學(xué)及生物學(xué)特性的不同,使它們?cè)谀撤N基質(zhì)中移動(dòng)速度不同而進(jìn)行分離和分析的方法。例如:我們利用物質(zhì)在溶解度、吸附能力、立體化學(xué)特性及分子的大小、帶電情況及離子交換、親和力的大小及特異的生物學(xué)反應(yīng)等方面的差異,使其在流動(dòng)相與固定相之間的分配系數(shù)(或稱分配常數(shù))不同,達(dá)到彼此分離的目的。
? 對(duì)于一個(gè)層析柱來說,可作如下基本假設(shè):
? 1. 層析柱的內(nèi)徑和柱內(nèi)的填料是均勻的,而且層析柱由若干層組成。每層高度為H,稱為一個(gè)理論塔板。塔板一部分為固定相占據(jù),一部分為流動(dòng)相占據(jù),且各塔板的流動(dòng)相體積相等,稱為板體積,以Vm表示。
? 2. 每個(gè)塔板內(nèi)溶質(zhì)分子在固定相與流動(dòng)相之間瞬間達(dá)到平衡,且忽略分子縱向擴(kuò)散。
? 3. 溶質(zhì)在各塔板上的分配系數(shù)是一常數(shù),與溶質(zhì)在塔板的量無關(guān)。
? 4. 流動(dòng)相通過層析柱可以看成是脈沖式的間歇過程(即不連續(xù)過程)。從一個(gè)塔板到另一個(gè)塔板流動(dòng)相體積為Vm。當(dāng)流過層析柱的流動(dòng)相的體積為V時(shí),則流動(dòng)相在每個(gè)塔板上跳越的次數(shù)為n:
n =?5. 溶質(zhì)開始加在層析柱的第零塔板上。根據(jù)以上假定,將連續(xù)的層析過程分解成了間歇的動(dòng)作,這與多次萃取過程相似,一個(gè)理論塔板相當(dāng)于一個(gè)兩相平衡的小單元。