1. 固定相：

? 固定相是層析的一個(gè)基質(zhì)。它可以是固體物質(zhì)（如吸附劑，凝膠，離子交換劑等），也可以是液體物質(zhì)（如固定在硅膠或纖維素上的溶液），這些基質(zhì)能與待分離的化合物進(jìn)行可逆的吸附，溶解，交換等作用。它對(duì)層析的效果起著關(guān)鍵的作用。

? 2. 流動(dòng)相：

? 在層析過程中，推動(dòng)固定相上待分離的物質(zhì)朝著一個(gè)方向移動(dòng)的液體、氣體或超臨界體等，都稱為流動(dòng)相。柱層析中一般稱為洗脫劑，薄層層析時(shí)稱為展層劑。它也是層析分離中的重要影響因素之一。

? 3. 分配系數(shù)及遷移率（或比移值）：

? 分配系數(shù)是指在一定的條件下，某種組分在固定相和流動(dòng)相中含量（濃度）的比值，常用K來表示。分配系數(shù)是層析中分離純化物質(zhì)的主要依據(jù)。

K=Cs/Cm? ?

其中Cs: 固定相中的濃度，Cm: 流動(dòng)相中的濃度。

? 遷移率（或比移值）是指：在一定條件下，在相同的時(shí)間內(nèi)某一組分在固定相移動(dòng)的距離與流動(dòng)相本身移動(dòng)的距離之比值。常用Rf來表示。（Rf? 1）可以看出：

?Rf ；反之，K Rf? ? ? ? ? ?K??

? 實(shí)驗(yàn)中我們還常用相對(duì)遷移率的概念。相對(duì)遷移率是指：在一定條件下，在相同時(shí)間內(nèi)，某一組分在固定相中移動(dòng)的距離與某一標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在固定相中移動(dòng)的距離之比值。它可以小于等于1，也可以大于1。用Rx來表示。不同物質(zhì)的分配系數(shù)或遷移率是不同的。分配系數(shù)或遷移率的差異程度是決定幾種物質(zhì)采用層析方法能否分離的先決條件。很顯然，差異越大，分離效果越理想。

分配系數(shù)主要與下列因素有關(guān)：①被分離物質(zhì)本身的性質(zhì)；②固定相和流動(dòng)相的性質(zhì)；③層析柱的溫度。對(duì)于溫度的影響有下列關(guān)系式：

lnK G0/RT)? ? ?= －(

式中： K為分配系數(shù)（或平衡常數(shù)）

G0為標(biāo)準(zhǔn)自由能變化?

?R為氣體常數(shù)

?T為絕對(duì)溫度

C,G0為負(fù)值，則溫度與分配系數(shù)成反比關(guān)系。通常溫度上升20這是層析分離的熱力學(xué)基礎(chǔ)。一般情況下，層析時(shí)組分的 K值下降一半，它將導(dǎo)致組分移動(dòng)速率增加。這也是為什么在層析時(shí)最好采用恒溫柱的原因。有時(shí)對(duì)于K值相近的不同物質(zhì)，可通過改變溫度的方法，增大K值之間的差異，達(dá)到分離的目的。

? 4. 分辨率（或分離度）

? 分辨率一般定義為：相鄰兩個(gè)峰的分開程度。用Rs來表示。圖3－2 是計(jì)算分辨率的示意圖。

圖 3－2 計(jì)算分辨率示意圖

VR1 ：組分1從進(jìn)樣點(diǎn)到對(duì)應(yīng)洗脫峰值之間洗脫液的總體積

VR2 ：組分2從進(jìn)樣點(diǎn)到對(duì)應(yīng)洗脫峰值之間洗脫液的總體積

? ? ? ? ?W1 ：組分1的洗脫峰寬度

? ? ? ? ?W2 ：組分2的洗脫峰寬度

? ? ? ? ?Y ：組分1和2洗脫峰值處洗脫液的總體積之差值

? ?分辨率：? ? ? Rs = =? ?

由上式可見，Rs值越大，兩種組分分離的越好。當(dāng)Rs = 1時(shí)，兩組分具有教好的分離，互相沾染約2%，即每種組分的純度約為98%。當(dāng)Rs=1.5時(shí)，兩組分基本完全分開，每種組分的純度可達(dá)到99.8%。如果兩種組分的濃度相差較大時(shí)，尤其要求較高的分辨率。?

? 為了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方法：

? ⑴ 使理論塔板數(shù)N增大，則Rs上升。

① 增加柱長(zhǎng)，N可增大，可提高分離度，但它造成分離的時(shí)間加長(zhǎng)，洗脫液體積增大，并使洗脫峰加寬，因此不是一種特別好的辦法。

② m以下，且壓力可達(dá)150kg/cm。它使Rs大大提高，也使分離的效率大大提高了。m；而HPLC柱子的固定相顆粒為10減小理論塔板的高度。如減小固定相顆粒的尺寸，并加大流動(dòng)相的壓力。高效液相色譜(HPLC)就是這一理論的實(shí)際應(yīng)用。一般液相層析的固定相顆粒為100

③ 采用適當(dāng)?shù)牧魉?，也可使理論塔板的高度降低，增大理論塔板?shù)。太高或太低的流速都是不可取的。對(duì)于一個(gè)層析柱，它有一個(gè)最佳的流速。特別是對(duì)于氣相色譜，流速影響相當(dāng)大。

? ⑵ 改變?nèi)萘恳蜃覦（固定相與流動(dòng)相中溶質(zhì)量的分布比）。一般是加大D，但D的數(shù)值通常不超過10，再大對(duì)提高Rs不明顯，反而使洗脫的時(shí)間延長(zhǎng)，譜帶加寬。一般D限制在1? D? 10，最佳范圍在1.5-5之間。我們可以通過改變柱溫（一般降低溫度），改變流動(dòng)相的性質(zhì)及組成（如改變pH值，離子強(qiáng)度，鹽濃度，有機(jī)溶劑比例等），或改變固定相體積與流動(dòng)相體積之比（如用細(xì)顆粒固定相，填充的緊密與均勻些），提高D值，使分離度增大。

? ⑶ （分離因子，也稱選擇性因子，是兩組分容量因子D之比），使Rs變大。實(shí)際上，使 增大 增大，就是使兩種組分的分配系數(shù)差值增大。同樣，我們可以通過改變固定相的性質(zhì)、組成，改變流動(dòng)相的性質(zhì)、組成，或者改變層析的溫度，使? 發(fā)生改變。應(yīng)當(dāng)指出的是，溫度對(duì)分辨率的影響，是對(duì)分離因子與理論塔板高度的綜合效應(yīng)。因?yàn)闇囟壬?，理論塔板高度有時(shí)會(huì)降低，有時(shí)會(huì)升高，這要根據(jù)實(shí)際情況去選擇。通常， 的變化對(duì)Rs影響最明顯。

? 總之，影響分離度或者說分離效率的因素是多方面的。我們應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)際情況綜合考慮，特別是對(duì)于生物大分子，我們還必須考慮它的穩(wěn)定性，活性等問題。如pH值、溫度等都會(huì)產(chǎn)生較大的影響，這是生化分離絕不能忽視的。否則，我們將不能得到預(yù)期的效果。

? 5. 正相色譜與反相色譜

正相色譜是指固定相的極性高于流動(dòng)相的極性，因此，在這種層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的分子移動(dòng)的速度快，先從柱中流出來。

反相色譜是指固定相的極性低于流動(dòng)相的極性，在這種層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動(dòng)的速度快而先從柱中流出。

一般來說，分離純化極性大的分子（帶電離子等）采用正相色譜（或正相柱），而分離純化極性小的有機(jī)分子（有機(jī)酸、醇、酚等）多采用反相色譜（或反相柱）。

? 6. 操作容量（或交換容量）

在一定條件下，某種組分與基質(zhì)（固定相）反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，存在于基質(zhì)上的飽和容量，我們稱為操作容量（或交換容量）。它的單位是毫摩爾（或毫克）/克（基質(zhì)）或毫摩爾（或毫克）/毫升（基質(zhì)），數(shù)值越大，表明基質(zhì)對(duì)該物質(zhì)的親合力越強(qiáng)。應(yīng)當(dāng)注意，同一種基質(zhì)對(duì)不同種類分子的操作容量是不相同的，這主要是由于分子大?。臻g效應(yīng)）、帶電荷的多少、溶劑的性質(zhì)等多種因素的影響。因此，實(shí)際操作時(shí)，加入的樣品量要盡量少些，特別是生物大分子，樣品的加入量更要進(jìn)行控制，否則用層析辦法不能得到有效的分離。