細(xì)胞增殖檢測的方法及原理—源井生物
細(xì)胞增殖(proliferation)是生活細(xì)胞的重要生理功能之一,是生物體的重要生命特征。細(xì)胞的增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。
技術(shù)原理
正常細(xì)胞代謝旺盛,其線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶,可將四唑鹽類物質(zhì)(如 MTT、XTT、WST-1和WST-8等 )還原為紫色結(jié)晶狀物質(zhì),沉積在細(xì)胞周圍,然后通過酶標(biāo)儀讀取OD值,從而檢測到細(xì)胞增值狀態(tài)。 Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)是一種基于WST-8而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒,可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖分析。 其基本原理為:該試劑盒中含有WST-8【化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深。對于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞 數(shù)目呈線性關(guān)系。

結(jié)果示例

參考文獻(xiàn) A. Deng, Danni et al. “p62 acts as an oncogene and is targeted by miR-124-3p in glioma.” Cancer cell international vol. 19 280. 6 Nov. 2019, doi:10.1186/s12935-019-1004-x
