組織解離/原代細胞分離和細胞收獲是酶在組織培養(yǎng)研究和細胞生物學研究中的主要應(yīng)用。 ?盡管多年來在這些應(yīng)用中廣泛使用酶，但它們在解離和收獲中的作用機制尚不清楚。 ?因此，選擇一種技術(shù)而不是另一種技術(shù)通常是武斷的，并且更多地基于過去的經(jīng)驗，而不是對方法為何有效以及哪些修改可以帶來更好結(jié)果的理解。

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Worthington?艾美捷細胞分離程序的目標是J大限度地提高功能上可行的解離細胞的產(chǎn)量。??有許多參數(shù)可能會影響任何特定程序的結(jié)果，包括但不限于：

1. ??組織類型

2. ??原產(chǎn)地物種

3. ??動物的年齡

4. ??基因改造（基因敲除等）

5. ??使用的解離介質(zhì)

6. ??使用的酶

7. ??使用的任何粗酶制劑中的雜質(zhì)

8. ??所用酶的濃度

9. ??溫度

10.?孵化時間

前四項通常不是選擇問題。?為了獲得合適的結(jié)果，還是根據(jù)經(jīng)驗定義其他變量條件。

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研究人員在科學文獻中搜索有關(guān)理想酶和組織解離的最佳條件的信息時，經(jīng)常會遇到相互矛盾的數(shù)據(jù)。??大部分變化源于細胞外基質(zhì)的復(fù)雜性和動態(tài)性，以及在細胞分離應(yīng)用中使用相對粗糙、不確定的酶制劑的歷史。??此外，細胞外基質(zhì)由多種蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂質(zhì)和糖脂組成，所有這些物質(zhì)的豐度因物種、組織和發(fā)育年齡而異。??常用的粗酶制劑如?Pronase、NF 1:250?和膠原酶含有多種濃度不同的蛋白酶，以及多種多糖酶、核酸酶和脂肪酶。

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本指南總結(jié)了我們關(guān)于這些酶如何完成組織解離和細胞收獲的“常規(guī)”操作的知識，描述了標準實驗室程序，提供了建立細胞分離方案的合乎邏輯的實驗方法，并列出了許多組織特異性參考文獻。

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關(guān)于Worthington?艾美捷組織解離常見的部分問題解答：

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1.什么是膠原酶?(CLS)?可接受的酶稀釋劑？

膠原酶可以直接溶解在平衡鹽溶液或選擇的緩沖液中。它應(yīng)該通過?0.22um?孔徑的膜進行無菌過濾。其適合pH范圍為7-9。

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2.新生兒心肌細胞分離系統(tǒng)（NCIS?試劑盒）可以用于成人嗎？

NCIS?試劑盒專門為五個獨立的組織解離而包裝，每個包含多達十二個新生大鼠心臟。NCIS?協(xié)議可在www.worthington-biochem.com/NCIS/default.html在線獲得。成年大鼠心肌細胞通常需要灌注，即。Langendorf?灌注系統(tǒng)和II?型膠原酶。

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3.Worthington?艾美捷Hank's、Earle's?和?Leibovitz L-15 Media?的數(shù)量是多少？

NCIS（新生兒心肌細胞分離系統(tǒng)）試劑盒中提供無菌不含鈣和鎂的?Hank?平衡鹽溶液。

NCIS?套件還包含一袋?Leibovitz L-15 Media Powder。將袋中的全部內(nèi)容物重新溶解到含有?800?毫升細胞培養(yǎng)級水的燒杯中。用額外的?100?毫升沖洗糞便?2-3?次。使總體積達到?1?升并通過?0.22?微米孔徑的過濾器過濾。裝有?1?升?Leibovitz L-15 Media?粉末的袋子是目錄號LK003250。

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Worthington專注于生物技術(shù)和生命科學研究，診斷，生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶，蛋白質(zhì)，核酸和試劑盒。其核心酶包括：膠原蛋白酶，脫氧核糖核酸酶I，彈性蛋白酶，木瓜蛋白酶，核糖核酸酶，胰蛋白酶等。艾美捷科技是Worthington的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。