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了解綠色熒光蛋白(GFP)及其可修飾標(biāo)記系列

2021-01-07 18:05 作者:星戈瑞-熒光居  | 我要投稿

綠色熒光蛋白(GFP)是一個(gè)蛋白質(zhì)的238組成的氨基酸殘基(26.9 kDa的呈現(xiàn)亮綠色)熒光時(shí),在藍(lán)色曝光以紫外線范圍內(nèi)。盡管許多其它海洋生物有相似的綠色熒光蛋白,GFP傳統(tǒng)上指的是第一個(gè)從分離出的蛋白水母 Aequorea victoria的。從GFP A. 維多利亞有一個(gè)主要的激發(fā)峰在波長 395納米和在475納米的小問題。其發(fā)射峰在509納米,這是在較低的綠色部分可見光譜。熒光量子產(chǎn)率的GFP(QY)為0.79。從該GFP 海三色堇(海腎腎形)具有498納米的單一主要激發(fā)峰。


在細(xì)胞和分子生物學(xué)中,綠色熒光蛋白基因經(jīng)常被用作一個(gè)表達(dá)的報(bào)道。在修飾的形式已經(jīng)用于制造生物傳感器,以及許多動(dòng)物已創(chuàng)建了表達(dá)GFP作為驗(yàn)證的概念,即一個(gè)基因可以在整個(gè)給定的生物體中表達(dá)。GFP基因可被引入生物體,并保持在通過育種,注射他們的基因組中與病毒載體,或細(xì)胞轉(zhuǎn)化。迄今為止,GFP基因已被引入,并在許多人表示細(xì)菌,酵母菌等菌類,魚類(如斑馬魚),植物,飛禽,和哺乳動(dòng)物細(xì)胞.

綠色熒光蛋白

在20世紀(jì)60年代和70年代,GFP,與單獨(dú)的發(fā)光蛋白質(zhì)一起水母發(fā)光蛋白(一種酶催化的破裂熒光素,釋放光),首次從純化水母,并研究了其屬性下村修。在A. 維多利亞,當(dāng)發(fā)生GFP熒光水母發(fā)光蛋白與之交互的Ca 2+離子,誘導(dǎo)青色光暈。一些這方面的發(fā)光能量被轉(zhuǎn)移到GFP,逐步轉(zhuǎn)向綠色整體色彩。然而,它作為分子生物學(xué)家的工具程序才開始實(shí)現(xiàn),直至1992年道格拉斯·普拉舍報(bào)道wtGFP的克隆和核苷酸序列在基因。該項(xiàng)目的資金已經(jīng)用完,所以普拉舍送基因樣本幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室。的實(shí)驗(yàn)室馬丁·查爾菲表示wtGFP的編碼序列,具有前幾個(gè)氨基酸缺失,在異源細(xì)胞中大腸桿菌 大腸桿菌和C. 線蟲,出版在結(jié)果科學(xué) 1994 弗雷德里克辻實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立地報(bào)道了重組蛋白質(zhì)一個(gè)月后的表達(dá)。值得注意的是,該綠色熒光蛋白分子折疊并在室溫下熒光,而不需要外源輔因子具體到水母。雖然此近wtGFP是熒光燈,它有幾個(gè)缺點(diǎn),包括雙峰激發(fā)光譜,pH值的敏感性,氯化物靈敏度,差熒光量子產(chǎn)率,耐光性差折疊37℃。

一個(gè)GFP的首次報(bào)道晶體結(jié)構(gòu)是,S65T突變體通過在雷明頓組的科技于1996年一個(gè)月后,菲利普斯基獨(dú)立報(bào)道野生型GFP的結(jié)構(gòu)自然生物技術(shù)。這些晶體結(jié)構(gòu)提供了重要的背景色形成和周邊殘留的相互作用。研究人員已經(jīng)修改了這些殘留和隨機(jī)突變產(chǎn)生在使用各種各樣的GFP衍生今天馬丁·查爾菲,下村修和錢永健分享了2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)為他們的綠色熒光蛋白的發(fā)現(xiàn)和開發(fā)。


優(yōu)點(diǎn)

GFP的最大優(yōu)點(diǎn)是,它是遺傳的,因?yàn)樗軌蚺c使用編碼DNA的GFP進(jìn)行變換。此外,可視化GFP是無創(chuàng)性; 它可以通過簡單地閃著光檢測。此外,綠色熒光蛋白是相對小的和惰性的分子,即似乎不使用任何感興趣的生物過程干涉。此外,如果用單體使用的是能夠在整個(gè)細(xì)胞容易擴(kuò)散

生物技術(shù)中的應(yīng)用研究

1.分子標(biāo)記

2.藥物篩選

3.融合抗體

4.生物傳感器

5腫瘤發(fā)病機(jī)制的應(yīng)用

6.在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的應(yīng)用

7.光伏發(fā)電



其他蛋白熒光標(biāo)記的產(chǎn)品目錄:

Avidin and streptavidin?親和素和鏈酶親和素產(chǎn)品:

Neutravidin-thiol(SH)? 中性親和素巰基修飾

Streptavidin (without modification)? ?鏈霉親和素

Streptavidin-CY5.5? CY5.5標(biāo)記鏈霉親和素

Streptavidin-CY5??? CY5標(biāo)記鏈霉親和素

Streptavidin-CY3??? CY3標(biāo)記鏈霉親和素

Streptavidin-TRITC? 四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記鏈霉親和素

Streptavidin-FITC?? 異硫氰酸熒光素標(biāo)記鏈酶親和素

Streptavidin-thiol (SH)? 鏈酶親和素修飾巰基

Avidin-CY3?? CY3標(biāo)記親和素

Avidin-CY5?? CY5標(biāo)記親和素

Avidin-CY5.5? CY5.5標(biāo)記親和素

Avidin (without modification)? ?親和素

Avidin-Sepharose? 瓊脂糖交聯(lián)親和素

Avidin-thiol?? 巰基修飾親和素

Avidin-FITC?? 異硫氰酸熒光素標(biāo)記親和素

Avidin-TRITC? 四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記親和素

Serum albumins (BSA,HSA)牛血清白蛋白和人血清白蛋白產(chǎn)品:

Human serum albumin, Sepharose beads ?HAS-Sepharose beads? 瓊脂糖珠偶聯(lián)人血清白蛋白

Human serum albumin thiol ??????HSA-SH? 巰基修飾人血清白蛋白

Human serum albumin Biotin?????? ?HSA-Biotin? 生物素修飾人血清白蛋白

Human serum albumin TRITC ??????HSA-TRITC 四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記人血清白蛋白

Human serum albumin Fluorescein?? ?HSA-FITC?

Human serum albumin CY5????????? HSA-CY5

Human serum albumin CY3????? ????HSA-CY3

Human serum albumin CY5.5???? ???HSA-CY5.5

Human serum albumin (HSA, without modification)


Bovine serum albumin, Sepharose beads? BSA-Sepharose beads? 瓊脂糖珠偶聯(lián)牛血清白蛋白

Bovine serum albumin thiol????????????? ?BSA-SH

Bovine serum albumin Biotin ?????????????BSA-Biotin

Bovine serum albumin TRITC ????????????BSA-TRITC

Bovine serum albumin Fluorescein???????? ?BSA-FITC

Bovine serum albumin CY5?????????????? BSA-CY5

Bovine serum albumin CY3?????????? ????BSA-CY3

Bovine serum albumin CY5.5??????????? ?BSA-CY5.5

Bovine serum albumin (BSA, without modification)

Bovine serum albumin tetramethylrhodamine (BSA-tetramethylrhodamine)

Concanavalin A刀豆求蛋白A產(chǎn)品:

Concanavalin A-CY5?? CY5標(biāo)記刀豆球蛋白A

Concanavalin A-CY3

Concanavalin A-CY5.5

Concanavalin A-Sepharose

Concanavalin A-Biotin

Concanavalin A-SH

Concanavalin A-tetramethylrhodamine? 四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)記刀豆球蛋白A

Concanavalin A-FITC

Concanavalin A (without modification)

Green fluorescent protein產(chǎn)品:

Green fluorescent protein (GFP) is a 27 kDa protein derived from Aequorea Victoria

Green fluorescent protein-agarose bead

Green fluorescent protein-Biotin

Green fluorescent protein-thiol

Green fluorescent protein (without modification)


小編YQ2021.1


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