卵巢切除誘發(fā)骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型【實(shí)驗(yàn)代做】

【造模機(jī)制】原發(fā)性骨質(zhì)疏松包括絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松和老年性骨質(zhì)疏松，主要表現(xiàn)為骨量減少，骨微觀結(jié)構(gòu)退變，骨強(qiáng)度下降而脆性增加、易于發(fā)生骨折：其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,諸多因素影響其發(fā)病過(guò)程，內(nèi)分泌功能紊亂是其確定發(fā)病因素之一。切除雙側(cè)卵巢（去勢(shì)模型）的大鼠體內(nèi)雌激索分泌水平下降,其對(duì)破骨細(xì)胞的抑制減弱，破骨細(xì)胞功能活躍，成骨細(xì)胞的功能代償性增強(qiáng),但總趨勢(shì)是骨吸收大于骨形成,骨骼呈高轉(zhuǎn)換狀態(tài)。本模型引起的骨質(zhì)疏松與人類女性絕經(jīng)后骨丟失相近。

【造模方法】選用3~10個(gè)月齡的健康雌性SD大鼠（300～400g），實(shí)驗(yàn)室常規(guī)喂養(yǎng)周。2%戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔麻醉,取俯臥位或仰臥位,術(shù)區(qū)剃毛,碘酒酒精消毒。手.術(shù)入路有兩種，其一是背側(cè)入路：在大鼠髂峰頂部外上方1.0cm左右，腰椎骶棘肌兩側(cè)做縱向切口長(zhǎng)約0.8cm,打開(kāi)后腹膜，切除雙側(cè)卵巢；其二為腹側(cè)入路，取下腹部正中切口長(zhǎng)約1.5cm,開(kāi)打腹腔，顯旗卵巢，提起后絲線結(jié)扎其蕾部，將其切除，然后再切另一側(cè)卵巢。卵巢為深粉紅色顆粒狀組織，多被其周圍脂肪組織所掩蓋，術(shù)中需撥開(kāi)這些組織，方能將其顯露。對(duì)照組手術(shù)方法與實(shí)驗(yàn)組相同，但打開(kāi)腹腔后不切除卵巢，即刻關(guān)膠。術(shù)后正常飲食，12周即可建立骨質(zhì)疏松模型。

本模型的主要檢測(cè)指標(biāo)：

1.全身骨密度測(cè)定 用5%氯胺酮腹腔注射（10mg/100g）使大鼠昏睡 10分鐘后，置于雙能X線骨密度儀的探頭下全身掃描，測(cè)定不同組間的動(dòng)物骨密度變化。

2.股骨抗彎強(qiáng)度測(cè)定 大鼠處死后取完整股骨,游標(biāo)卡尺測(cè)定股骨中段的寬度和厚度以計(jì)算截面積。將股骨放在萬(wàn)能材料實(shí)驗(yàn)機(jī)支架上，在股骨中間施壓，記錄發(fā)生折斷時(shí)的最大壓力載荷并計(jì)算抗彎強(qiáng)度（即單位截面積上的最大壓力載荷）。

3、股骨或脊椎骨骨計(jì)量學(xué)變化應(yīng)用數(shù)學(xué)和幾何學(xué)的方法精確測(cè)量并研究骨組織的細(xì)微結(jié)構(gòu)（如骨小梁面積、厚度、數(shù)量、分離度等）和骨量（松質(zhì)骨和密質(zhì)骨）等的形態(tài)學(xué)變化。通過(guò)制作不脫鈣骨組織切片，在普通光或熒光顯微鏡下攝片并把圖片輸入電腦，應(yīng)用特定軟件經(jīng)計(jì)算機(jī)處理得出所需參數(shù)。這一指標(biāo)是觀察骨質(zhì)疏松發(fā)生后骨骼內(nèi)骨量丟失部位和程度最直觀的指標(biāo)。

4.骨組織脫鈣切片制備 骨標(biāo)本脫鈣后,行 HE 等各種染色觀察骨骼內(nèi)各種細(xì)胞的形態(tài)或用于免疫組織化學(xué)分析骨骼內(nèi)各種細(xì)胞因子的表達(dá)情況。

5.用放射免疫法測(cè)定雌二醇（E）值，以了解體內(nèi)雌激素變化。

6.生化檢測(cè)血清鈣、堿性磷酸酶、尿羥脯氨酸等骨吸收與重建指標(biāo)，以了解骨轉(zhuǎn)換水平的高低。

【模型特點(diǎn)】術(shù)后8~12周即可成功造模，表現(xiàn)為股骨和全身的骨密度降低，骨陷窩間隙增大，骨細(xì)胞減少，破骨細(xì)胞增多，骨小梁體積降低，厚度下降，數(shù)量減少，小梁骨彼此分離；股骨骨皮質(zhì)變薄，進(jìn)行性的股骨、脛骨抗彎強(qiáng)度降低及脆性增加。

【應(yīng)用范圍】本模型能夠模擬成年婦女雌激素缺乏引起的骨質(zhì)疏松的病理表現(xiàn)和臨床癥狀，并有足夠的時(shí)間觀察此類骨質(zhì)疏松發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中骨骼的形態(tài)學(xué)變化及病理生理學(xué)反應(yīng)，故本模型用于研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松發(fā)病機(jī)制與治療及其相關(guān)問(wèn)題。

【注意事項(xiàng)】

1.應(yīng)選用6~10個(gè)月齡雌性大鼠造模較佳 雌性大鼠在6~9個(gè)月齡時(shí)進(jìn)入骨生長(zhǎng)靜止期，骨骺開(kāi)始封閉，骨代謝相對(duì)穩(wěn)定，到10個(gè)月時(shí)骨膜生長(zhǎng)結(jié)束，達(dá)到峰值骨量年齡，此后骨量相對(duì)穩(wěn)定；21～24個(gè)月以后由于雌激素缺乏，骨量丟失加速。本模型應(yīng)用骨生長(zhǎng)靜止期未交配的6~10個(gè)月齡雌性大鼠造模較佳，而10～12個(gè)月的雌性大鼠對(duì)峰值骨量以后的骨丟失研究有價(jià)值。

2.應(yīng)適當(dāng)控制動(dòng)物的體重 由于體重與骨密度成正相關(guān)，雌激素水平下降可引起體重上升，體重增加時(shí)骨密度增高可以部分抵消雌激素缺乏引起的骨丟失，所以實(shí)驗(yàn)中應(yīng)適當(dāng)控制動(dòng)物的體重，減少飲食，但需注意過(guò)度的控制飲食可使松質(zhì)骨的丟失加重,使骨質(zhì)疏松加速發(fā)展。

【模型評(píng)價(jià)】本模型造模簡(jiǎn)單，成功率高，重復(fù)性好，動(dòng)物骨丟失與絕經(jīng)后婦女的骨丟失相似，在病因?qū)W上有直接的因果關(guān)系，是研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的較好模型。

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