酶聯(lián)免疫斑點法技術(shù)，ELISpot

是一種用于在單細胞水平上對分泌細胞因子或免疫球蛋白的細胞進行定量的靈敏分析方法。細胞分泌的細胞因子、免疫球蛋白或其他靶蛋白在分泌后立即被特異性抗體捕獲，并在整個刺激過程中被持續(xù)捕獲。ELISpot可以在25萬個細胞中檢測出一個有響應(yīng)的細胞，是zui靈敏的細胞分析方法之一。該檢測方法穩(wěn)健且易于操作，因此既適用于大規(guī)模試驗，也適用于實用研究。ELISpot已被廣泛應(yīng)用于研究感染性疾病、癌癥、過敏和自身免疫性疾病的特異性免疫反應(yīng)，以及特別熱門的新冠病毒疫苗開發(fā)領(lǐng)域。

?

ELISpot實驗步驟與原理示意 （示意圖如下）

大致原理上分為如下7個步驟，詳情已具體產(chǎn)品說明書為準

Step.1?包被：將單克隆捕獲抗體添加到乙醇處理的PVDF膜板上

Step.2?細胞孵育：在有刺激的情況下加入細胞，孵育，細胞分泌細胞因子

Step.3?捕獲分泌物：激活后的細胞，分泌的細胞因子被周圍的抗體結(jié)合捕獲

Step.4?檢測抗體：去除細胞，清洗平板，加入生物素化的檢測抗體

Step.5?鏈霉親和素-酶偶聯(lián)物：加入鏈霉親和素偶聯(lián)物，保證后續(xù)在膜上形成斑點

Step.6?加反應(yīng)底物：當酶催化時，顯色底物形成不溶性沉淀

Step.7?結(jié)果分析：在自動點閱讀器中對結(jié)果進行分析。每個斑點對應(yīng)一個分析物分泌細胞

來源：艾美捷

ELISpot通常用于哪些領(lǐng)域呢？

ELISpot常見的領(lǐng)域包括：T細胞/B細胞功能研究、自身免疫檢測、器官移植、疫苗和藥品的研發(fā)與檢測、腫瘤研究、傳染病的研究和檢測、病毒研究等。下面簡單講述一下T細胞，B細胞的ELISpot分析應(yīng)用：

?

T細胞的ELISpot

ELISpot是研究特異性免疫反應(yīng)的敏感方法，能夠區(qū)分活化的T細胞亞群。例如，Th1細胞產(chǎn)生干擾素-γ、IL-2和TNF-α，而Th2細胞產(chǎn)生其他細胞因子，如IL-4、IL-5和IL-13。例如，這被廣泛應(yīng)用于傳染病、癌癥、過敏和自身免疫性疾病的研究。

?

在疫苗研究中，ELISpot是一種標準工具，用于通過測量激發(fā)強大T細胞反應(yīng)的能力(通常是干擾素-γ的分泌)來確定疫苗的有效性。今天，基于ELISpot的診斷分析已經(jīng)可用，包括一種通過測量T細胞對結(jié)核分枝桿菌特定抗原的反應(yīng)分泌干擾素-γ來檢測結(jié)核病感染患者的測試。

?

B細胞的ELISpot

B細胞ELISpot分析是分析抗體免疫反應(yīng)的有力工具，并且是僅有的少數(shù)能直接聚焦于 抗體分泌細胞（ASC）的分析方法之一。 這種J為靈敏的方法使研究人員能夠識別樣 品中的ASC，并測量其總數(shù)以及那些對特定抗原分泌抗體的數(shù)量。

例如，B細胞ELISpot可以揭示血液中長期記憶B細胞的數(shù)量，這是無法用其他方法評 估的。B細胞ELISpot的主要應(yīng)用包括檢測B細胞對感染的反應(yīng)和疫苗引發(fā)的反應(yīng)。

?

如何挑選合適的ELISpot研究工具？

針對不同的研究需要，使用不同格式的ELISpot試劑盒，從ELISpotBASIC到完整的ELISpotPRO試劑盒。

分析物（指標）與種屬的對應(yīng)表格（如下指標均有對應(yīng)產(chǎn)品）：

* 以上僅適用于科學研究使用.來源：艾美捷