脂多糖(LPS)的提取與純化
脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)根據(jù)О-特異性側(cè)鏈的存在與否可分為光滑型(smooth-form,S-LPS)用粗糙型(rough-form,R-LPS)兩大類(lèi),前者的組成成分有類(lèi)脂A、核心寡聚糖及О-特異性側(cè)鏈,而后者僅含有類(lèi)脂A及完整或部分核心成分。這兩類(lèi)LPS分子在某些物理特征上表現(xiàn)出顯著的差異性,主要表現(xiàn)為表觀分子量及水溶性方面。

純度對(duì)于研究LPS的物理、化學(xué)及生物學(xué)特性是至關(guān)重要的,因?yàn)榧?xì)菌其他成分的污染可影響LPS的物理特性及生物學(xué)活性。LPS制劑中最常見(jiàn)的污染物質(zhì)是核酸、蛋白質(zhì)及多聚糖,這類(lèi)污染物質(zhì)存在的量取決于LPS的提取和純化方法。
70年代以前提取LPS最常用的方法為Westphal等于1952年介紹的酚水法(phenol water,PW),用這一方法提取的LPS純度較高。污染蛋白質(zhì)含量?jī)H為1~3%,而在此以前所應(yīng)用的方法(如三氯醋酸法,超聲波法、正丁醇提取法等)所提取得到的LPS蛋白污染量可超過(guò)10%,因而PW方法是一種較為有效的方法。
自1969年Galanos?等介紹苯酚-氯仿-石油醚(phenol-chloro-form-petroleum ether,PCP)法后,LPS的純度又得到了顯著的提高。一方面,經(jīng)PW法提取得到的S-LPS可以PCP法純化,另一方面,R-LPS由于脂溶性成分的含量較高,因而可直接應(yīng)用PCP法進(jìn)行提取與純化。PCP法可去除LPS中常見(jiàn)的污染物質(zhì)。最終得到的純化LPS不含核酸及多聚糖,蛋白含量亦可控制在1%以下。
LPS中存在的另一類(lèi)污染物質(zhì)為無(wú)機(jī)金屬離子及小分子量多胺成分,它們的存在可影響LPS的物理性狀及生物學(xué)活性。應(yīng)用電透析可將這類(lèi)成分除去。