熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共輪雙鍵體系化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，受到紫外光或藍(lán)紫光照射時，可激發(fā)成為激發(fā)態(tài)，當(dāng)從激發(fā)態(tài)恢復(fù)基態(tài)時，發(fā)出熒光。蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光物質(zhì)共價(jià)結(jié)合在目標(biāo)分子的某個基團(tuán)上，利用它的熒光特性來提供被研究對象的信息。瑞禧生物小編給大家分享Cy5熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標(biāo)記量)的制備，一起來看！

一.?產(chǎn)品簡介

Cy5熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒可以通過抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴氨酸），簡單、快速地實(shí)現(xiàn)抗體/蛋白與Cy5熒光染料的共價(jià)偶聯(lián)。此為通用型試劑盒，適合Cy5熒光標(biāo)記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy5熒光染料，且不會損失抗體/蛋白。

二.?試劑盒組成與存儲

收到后將Cy5-mix(含10 % Cy5染料)儲存在-20?C。Coupling Reagent、Cy5-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長期保存。

試劑盒組成數(shù)量保存溫度Cy5-mix (含10 % Cy5染料)10 mg-20 ℃Coupling Reagent2 mL+4 ℃或-20 ℃Cy5-mix溶解液2 mL+4 ℃或-20 ℃超濾管 (3.5kD)2 支室溫

三.?實(shí)驗(yàn)步驟

1. 取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10 mg)，溶解于1 mL純水中，加入100 μL Coupling Reagent，混合均勻待用。

注：抗體/蛋白在1~10 mg內(nèi)均用1mL純水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent。超出此范圍，請按比例增減，如0.5 mg抗體/蛋白，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。

(以下步驟按標(biāo)記1 mg抗體/蛋白為例)

2. 根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度，稱取0.1 ~1 mg Cy5-mix固體加至第1步溶液，充分混合溶解。

注：(a) 若Cy5-mix用量超出1mg，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過量，引起熒光部分淬滅;

(b) 若低于1 mg的Cy5-mix難以稱取，可先取1 mg Cy5-mix固體溶解于100 μL Cy5-mix溶解液，再按需取Cy5-mix溶液加至第1步溶液。由于Cy5-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存。

3. 室溫避光反應(yīng)30min，延長反應(yīng)時間不影響偶聯(lián)效率。

4. 將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管，10000 rpm超濾5 min，即可除去未反應(yīng)的Cy5-mix，為提高純度，可加入純水重懸抗體/蛋白，重復(fù)超濾1~2次。

5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy5熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液。

四.?注意事項(xiàng)

1.熒光標(biāo)記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分，建議低于以下比例:

干擾組分建議比例甘油< 50%疊氮化鈉< 0.1%含氨基的緩沖液（如Tris）0%pH7.0-8.5伯胺（如氨基酸、乙醇胺等）0%硫醇（如巰基乙醇、DTT等）0%

注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記。

2. 偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存。通常在4 ℃下可保存6~12個月。如需保存更長時間，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油，在-20℃保存。

RXYWX.2022.7.27