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快速富集DNA有高招——EpiNext CUT&RUN快速套件來了~

2021-10-20 16:16 作者:艾美捷  | 我要投稿

CUT&RUN(Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)在細(xì)胞內(nèi)利用抗體靶向定位目標(biāo)蛋白,?再由pA/G-微球菌核酸酶(Micrococcal nucleasel, MNase)對(duì)目標(biāo)蛋白兩端的DNA進(jìn)行切割,從而將目標(biāo)蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物釋放到細(xì)胞外。

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作為ChIP的高效替代方案,?CUT&RUN技術(shù)在蛋白質(zhì)-DNA研究中將會(huì)被越來越廣泛地使用。以下為CUT&RUN與Chip-seq對(duì)比圖:

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圖:分別對(duì)K-562細(xì)胞的H3K4me3和H3K27me3所結(jié)合的DNA進(jìn)行測(cè)序,用于ChIP的細(xì)胞數(shù)量為2000萬,用于?CUT&RUN的細(xì)胞數(shù)為50萬。對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析,CUT&RUN有著卓越的靈敏度和信噪比,測(cè)序深度減少了10倍以上,細(xì)胞的需求減少了40倍。

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艾美捷?EpiGentek EpiNext CUT&RUN快速套件,以優(yōu)惠價(jià)格從低輸入提供無超聲破碎,以可靠地識(shí)別真正的目標(biāo)蛋白質(zhì)富集區(qū)域并實(shí)現(xiàn)高分辨率定位??蓾M足用戶快速富集蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA并繪制全基因組蛋白質(zhì)/DNA相互作用的圖譜的需求。

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EpiNext CUT&RUN快速套件包含執(zhí)行測(cè)試所需的所有必要試劑從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或分離的細(xì)胞核/染色質(zhì)開始成功切割和運(yùn)行。在反應(yīng)中,,細(xì)胞核是從細(xì)胞中分離出來的。靶蛋白DNA復(fù)合物與芯片級(jí)結(jié)合/捕獲感興趣的抗體。使用獨(dú)特的核酸裂解酶混合物,染色質(zhì)片段化,目標(biāo)蛋白質(zhì)/DNA復(fù)合物兩端的DNA序列劈開/移除。同時(shí),目標(biāo)蛋白占據(jù)的DNA序列不受影響。然后純化和洗脫靶蛋白結(jié)合的DNA。富集的DNA可用于用各種方法分析蛋白質(zhì)與DNA的相互作用,特別是下一代測(cè)序。試劑盒中包括陽性對(duì)照抗體(抗H3K9me3),陰性對(duì)照非免疫IgG,和對(duì)照染色質(zhì),可用于證明試劑盒的有效性和現(xiàn)場(chǎng)性能PCR/生物分析儀步驟。

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來源:https://www.amyjet.com/featured/cutrun-2.shtml


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