關(guān)鍵詞：細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞污染 細(xì)胞空泡化?

將獲得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再參加培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以必定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接參加培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入成長狀態(tài)。?

細(xì)胞空泡化是什么？

變性細(xì)胞的胞質(zhì)、胞核內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡(水泡)，細(xì)胞呈蜂窩狀或網(wǎng)狀的現(xiàn)象。變性嚴(yán)重者，小水泡相互融合成大水泡，細(xì)胞核懸于中央，或被擠于一側(cè)，細(xì)胞形體顯著腫大，胞質(zhì)空白，外形如氣球狀。

胞質(zhì)空泡化可以是可逆的，也可以是不可逆的?？赡娴陌|(zhì)空泡化通常只是在暴露于誘導(dǎo)劑后能觀察到，這種胞質(zhì)空泡化可以引起細(xì)胞狀態(tài)的改變或者細(xì)胞周期停滯。而不可逆的胞質(zhì)空泡化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，許多自然或者人工合成的化合物以及被細(xì)菌或者病毒感染后均會(huì)出現(xiàn)不可逆的胞質(zhì)空泡化，因此出現(xiàn)這種情況，細(xì)胞便不可再用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中。?

出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的原因

1）細(xì)胞老化

原代細(xì)胞培養(yǎng)的過程中經(jīng)常出現(xiàn)這樣的情況，是有些細(xì)胞處于終末分化狀態(tài)，不會(huì)再分裂，時(shí)間長了就會(huì)空泡化而死亡。

2）PH值

培養(yǎng)液的PH值與細(xì)胞正常所需PH值差別太大。

3）胰酶消化

胰酶消化時(shí)間過長，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)受損，有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)這種情況。除此之外，如果消化細(xì)胞吹打時(shí)力度過大，產(chǎn)生太多氣泡，長期存在也會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象。?

4）自噬

細(xì)胞缺乏營養(yǎng)導(dǎo)致饑餓誘導(dǎo)形成自噬也會(huì)形成空泡化，但是這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的，只有在電鏡下才能觀察到。

5）細(xì)胞代謝

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導(dǎo)致細(xì)胞代謝出現(xiàn)問題，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的情況。

6）污染

衣原體感染：一旦一些細(xì)胞出現(xiàn)空泡化，繼續(xù)培養(yǎng)，空泡范圍會(huì)擴(kuò)大，即使傳代后也如此，出現(xiàn)這種情況，細(xì)胞基本無法挽救。后來檢測發(fā)現(xiàn)，此種細(xì)胞存在支/衣原體的感染。?

細(xì)胞空泡化我們應(yīng)該如何解決？

1）如果是因?yàn)榧?xì)胞老化的原因，可以通過復(fù)蘇代數(shù)靠前的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

2）如果是培養(yǎng)液PH的問題，可以通過更換培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值，再進(jìn)行培養(yǎng)。

3）在傳代時(shí)，要選用合適濃度的胰酶和選取適當(dāng)?shù)南瘯r(shí)間進(jìn)行消化，在操作時(shí)避免吹打太過用力出現(xiàn)太多氣泡。

4）要保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)充足，可以通過增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。

5）盡量使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清，因?yàn)檫@樣的血清營養(yǎng)豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現(xiàn)這類問題。

6）在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，操作時(shí)要規(guī)范，減少污染的可能性?？梢酝ㄟ^試劑盒檢測細(xì)胞是否污染，對于已經(jīng)污染的細(xì)胞滅菌后直接處理，避免污染其他細(xì)胞。

細(xì)胞房定期整體消毒對于預(yù)防細(xì)胞污染出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象有重大意義，而比林科漢過氧化氫干霧消毒技術(shù)，智能化、數(shù)字化、可視化的全自動(dòng)細(xì)胞房消毒方式廣泛受到關(guān)注。其采用冷蒸發(fā)文丘里干霧技術(shù)原理，干霧技術(shù)累積十五年，世界前沿性先進(jìn)，干霧氣體肉眼不可見、無孔不入。其關(guān)鍵核心是配合使用了比利時(shí)進(jìn)口的細(xì)胞房專用殺孢子劑，低濃度無腐蝕，高活性殺菌效果。

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