艾美捷磷酸二酯酶 I相關(guān)研究和測(cè)定方案
毒液核酸外切酶(磷酸二酯酶I)連續(xù)水解3'-OH端的核糖和脫氧核糖寡核苷酸中的5'-單核苷酸。該酶的最佳pH范圍為9.8-10.4,分子量為115kDa。磷酸二酯酶被谷胱甘肽、半胱氨酸和抗壞血酸等還原劑抑制。5mM EDTA完全抑制,ATP、ADP和AMP為部分抑制劑。該酶對(duì)Mg2有很大的需求+ ??
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艾美捷科WBC-LS003928磷酸二酯酶?I僅用于科研,不可用于臨床診斷。??
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磷酸二酯酶?I相關(guān)研究:
無核酸酶白蛋白?脫氧核糖核酸酶?I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF) 組蛋白 (H, NHL) 溶菌酶 (LY/LYSF) 微球菌核酸酶 (NFCP) 核酸酶,S1 (中新核酸/新核酸) 核酸,DNA,大腸桿菌,λ/片段,RNA磷酸酶,堿性(CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC) 磷酸二酯酶 II (SPH) 蛋白酶 K (PROK/PROKS)逆轉(zhuǎn)錄酶,重組 HIV (RTHIV)核糖核酸酶 A (R/RAF/RASE/RS/RPDF)核糖核酸酶 T1,不含動(dòng)物源性 (RT1S) ?
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磷酸二酯酶?I(WBC-LS003928)測(cè)定:
方法?該測(cè)定基本上是Razell and Khorana(1959)的測(cè)定,其中反應(yīng)速度由對(duì)硝基苯基胸苷-400'-磷酸水解引起的5nm處吸光度的增加來確定。在指定條件下,一個(gè)單位在pH 5.8和9°C下每分鐘水解一微摩爾對(duì)硝基苯基胸苷-25'-磷酸鹽。?
試劑
0.11 M Tris?HCl 緩沖液,pH 8.9,含 0.11 M 氯化鈉和 15 mM 氯化鎂2(三?鹽緩沖液)?
5 mM 對(duì)硝基苯基胸苷-5'-磷酸鹽。注意:商業(yè)制劑的純度略有不同,在制備該試劑時(shí)應(yīng)考慮。
酶
以一毫克/毫升的速度溶解在三*鹽緩沖液中,以獲得0.02-0.04ΔA /分鐘的速率。?
程序
將分光光度計(jì)設(shè)置為?400 nm 和 25°C。 移液到微量比色皿中,如下所示:
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磷酸二酯酶?I部分引用文獻(xiàn):
Bruns, M. and Philipps, G.?
Action of Venom Phosphodiesterase on Aminoacyl-tRNA from Escherichia coli , Biochim Biophys Acta 217 , 189 , 1970?
Cheung, W.?
Cyclic 3',5'-Nucleotide Phosphodiesterase: Pronounced Stimulation by Snake Venom , Biochem Biophys Res Commun 29 , 478 , 1967?
Felix, F. , Potter, J. and Laskowski, M.?
Action of Venom Phosphodiesterase on Deoxyriboligonucleotides Carrying a Monoesterified Phosphate on Carbon 3' , J Biol Chem 235 , 1150 , 1960 ?
Worthington專注于生物技術(shù)和生命科學(xué)研究,診斷,生物制藥和生物加工應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶,蛋白質(zhì),核酸和試劑盒。其核心酶產(chǎn)品包括:膠原蛋白酶,脫氧核糖核酸酶I,彈性蛋白酶,木瓜蛋白酶,核糖核酸酶,胰蛋白酶等。