核酸定量這樣選？熒光探針VS分光光度法
DNA編碼所有的遺傳信息，是創(chuàng)造所有生物生命的藍(lán)圖。它充當(dāng)允許遺傳物質(zhì)在世代之間傳遞的存儲(chǔ)設(shè)備。而RNA充當(dāng)讀取DNA中存儲(chǔ)信息的讀卡器。DNA中存儲(chǔ)的遺傳信息由RNA攜帶，同時(shí)RNA充當(dāng)核糖體的信使，并在核糖體中合成蛋白質(zhì)。分子生物學(xué)這整個(gè)過程稱為“中心法則”。
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基于核酸的檢測(cè)的范圍繼續(xù)擴(kuò)大，關(guān)于選擇核酸檢測(cè)方法有很多。
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目前常用的是分光光度法，分光光度法利用了核酸的紫外吸收特性。核酸，包括DNA和RNA，均由脫氧核糖或核糖、磷酸基及含氮堿基構(gòu)成。其中，由于堿基含有芳香環(huán)結(jié)構(gòu)，因此具有紫外吸收的特性。通過測(cè)定260nm處的吸光度，對(duì)DNA和RNA進(jìn)行定量。與此同時(shí)，還能通過計(jì)算OD260/OD280估計(jì)核酸的純度。由于此法不具有選擇性，無法區(qū)分DNA、RNA或蛋白質(zhì)。檢測(cè)數(shù)值極易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機(jī)化合物)和堿基組成差異的影響。
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今天給大家介紹熒光染料法，AAT開發(fā)的多款熒光染料可以特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA相結(jié)合，并在特定波長(zhǎng)光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光，這一系統(tǒng)不會(huì)檢測(cè)到樣本中可能存在的其他雜質(zhì)分子，熒光強(qiáng)度與樣品中的靶分子濃度相對(duì)應(yīng)。
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DNA和RNA定量試劑
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Helixyte Green dsDNA定量試劑（17597）和StrandBrite?Green RNA定量試劑（17611）分別對(duì)雙鏈DNA和單鏈RNA進(jìn)行了優(yōu)化。它們對(duì)核酸有很高的親和力，對(duì)結(jié)合核酸有極大的熒光增強(qiáng)作用，使得在幾分鐘內(nèi)直接檢測(cè)復(fù)雜溶液中微量核酸成為可能，而且一般不會(huì)受到其他生物分子的干擾。
圖1.小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進(jìn)行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen ?具有幾乎相同的性能。
Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑，與dsDNA結(jié)合后可顯著增強(qiáng)熒光。它具有與PicoGreen?相同的光譜特性，因此是PicoGreen?的絕佳替代品（PicoGreen?是Invitrogen的商標(biāo)）。它是可用于定量溶液中DNA的最敏感的染色劑之一。使用Helixyte Green，您可以在ssDNA，RNA和游離核苷酸存在的情況下選擇性地檢測(cè)低至25 pg / ml的dsDNA。該測(cè)定法在三個(gè)數(shù)量級(jí)上是線性的，并且?guī)缀鯖]有序列依賴性，使您能夠準(zhǔn)確地測(cè)量來自多種來源的DNA，包括基因組DNA，病毒DNA，微量制備DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
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在進(jìn)行Northern雜交分析、S1核酸酶分析、RNase保護(hù)分析、cDNA文庫(kù)制備、反轉(zhuǎn)錄PCR之前，檢測(cè)和定量少量RNA對(duì)于多種分子生物學(xué)過程非常重要，例如測(cè)量體外轉(zhuǎn)錄RNA的產(chǎn)量和測(cè)量RNA濃度。測(cè)量核酸濃度最常用的技術(shù)是在260nm處測(cè)定吸光度，吸光度法的主要缺點(diǎn)是蛋白質(zhì)、游離核苷酸和其他紫外線吸收化合物的干擾，但使用敏感的熒光核酸試劑可以緩解這種干擾問題。StrandBrite RNA定量試劑是一種用于溶液中RNA定量的超靈敏熒光核酸染料。StrandBrite RNA定量試劑可以用熒光酶標(biāo)儀或熒光分析儀檢測(cè)到低至5ng/mL的RNA。
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Helixyte?Green?dsDNA和StrandBrite Green RNA探針的優(yōu)勢(shì)：
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高靈敏度：Helixyte?Green和StrandBrite?Green的靈敏度比UV吸收率測(cè)定法高10,000倍
選擇性高：與紫外吸收的測(cè)量不同，這些檢測(cè)不受蛋白質(zhì)，游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響，從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復(fù)雜混合物（例如血清或全血）中更加準(zhǔn)確。
操作簡(jiǎn)單：這些檢測(cè)方法非常簡(jiǎn)單，不需要分離步驟，因此非常適合自動(dòng)化，高通量篩選
檢范圍廣：對(duì)于Helixyte Green的檢測(cè)，定量在四個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)都是準(zhǔn)確的?；赟trandBrite 的熒光檢測(cè)在三個(gè)數(shù)量級(jí)上都是準(zhǔn)確的。
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