摘 ?要: 近年來，我國(guó)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛，病害問題也日益突出，嚴(yán)重制約了養(yǎng)殖行業(yè)的發(fā)展，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前，細(xì)菌性疾病是危害魚類養(yǎng)殖的最主要的生物源性疾病。為了探求和補(bǔ)充對(duì)維氏氣單胞菌引起的水產(chǎn)動(dòng)物病害防治有效的中草藥種類，本試驗(yàn)以從羅氏沼蝦體內(nèi)分離得到并通過生化鑒定初步確定的維氏氣單胞菌作為研究對(duì)象，選取24種中草藥進(jìn)行初篩，測(cè)定各中草藥的抑菌圈直徑，對(duì)中高度敏感且尚無關(guān)于維氏氣單胞菌抑菌情況報(bào)道的幾種中草藥進(jìn)行最小抑菌濃度(MIC)試驗(yàn)。結(jié)果表明:有7種中草藥對(duì)維氏氣單胞菌有抑菌效果，但抑菌活性差別較大。其中石榴皮對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌效果為高度敏感，地榆和訶子對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌效果為中度敏感，五倍子、烏梅、木瓜和白芍對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌效果為低度敏感。五倍子的 MIC 值最低，為7.125 ?mg/mL; 烏梅為15.625 mg/mL; 地榆、訶子均為62.5 mg/mL而木瓜的 MIC 值最高， 為125 mg/mL。表明石榴皮、五倍子、烏梅、地榆、訶子、白芍這 6 種中草藥對(duì)羅非魚維氏氣單胞菌的抑菌效果較好。

關(guān)鍵詞: 中草藥;抑菌效果;維氏氣單胞菌; 羅氏沼蝦;最小抑菌濃度(MIC)；最小殺菌濃度（MBC）
In vitro antibacterial activity of 24 Chinese herbal medicines against pathogenic Aeromonas veckert
Supervisor ?Xiao-Jun Zhang
ABSTRACT: In recent years, many countries’ aquaculture industry has developed rapidly, and at the same time, due to the expansion of farming scale and the increase in farming density, aquatic animal diseases caused by bacteria and virus frequently broke out, lead to huge economic losses in aquaculture. At present, the diseases caused by Aeromonas veronii have become the most general bacterial diseases that endanger fish farming. In order to explore and supplement the types of Chinese herbal medicines that are effective in the prevention and control of aquatic animal diseases caused by A. veronii, the bacteria JDM1-1 isolated from Macrobrachium rosenbergii was used in this experiment, which was determined as A. veronii in previous experiment. A preliminary screening of 24 Chinese herbal medicines was carried out to determine the diameter of the inhibition zone of each Chinese herbal medicine. The minimum inhibitory concentration (MIC) test was carried out on 7 kinds of Chinese herbal medicines which were highly sensitive and had no reports on the antibacterial situation of A. veronii. Among them, pomegranate peel is highly sensitive to the antibacterial effect of A. veronii, Sanyu and Myrobalan are moderately sensitive to the antibacterial effect of A. veronii, and Chinese gall, ebony, papaya and white peony are moderately sensitive to A. veronii. The MIC of Rhus chinensis Mill is the lowest, 7.125 mg/mL; The MIC of the Prunusmume is 15.625 mg/mL; The MIC of both Sanguilu and Myrobalan are 62.5 mg/mL, while the MIC of papaya is the highest, which is 125 mg/mL. The results of this study shows that the six Chinese herbal medicines of pomegranate peel, gallnut, ebony, sanyu, myrobalan, and white peony have better antibacterial effect on the A. veronii.
Key words: Chinese herbal medicine; antibacterial effect; Aeromonas veronii; Macrobrachium rosenbergii; minimum inhibitory concentration (MIC); minimum bactericidal concentration (MBC)

1. 前言

1.1. 維氏氣單胞菌
1.1.1. 維氏氣單胞菌生物學(xué)特征
維氏氣單胞菌亦被稱為維羅納氣單胞菌，隸屬氣單胞菌科（Aeromonadaceae）、氣單胞菌屬（Aeromonas）。維氏氣單胞菌有雜交群分類屬 DHG8/10，致病菌株多數(shù)屬 DHG8[1]。該菌在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)旺盛培養(yǎng)24ｈ后菌落直徑多在1．3ｍｍ呈圓形、表面光滑、邊緣整齊、灰白色、不透明、中央稍隆起，在血平板上生長(zhǎng)良好可以形成明顯的β－溶血。
1.1.2. 維氏氣單胞菌毒力因子
維氏氣單胞菌可產(chǎn)生一系列的毒力因子,引起敗血癥和胃腸炎等疾病與人類疾病的關(guān)系也較為密切。毒力因子如氣溶素(aerolysin)、腸毒素(enterotoxin)和粘附因子，氣溶素是主要的毒力因子，因?yàn)轸~類感染致病性維氏氣單胞菌后常常有出血現(xiàn)象，其中腸毒素包括兩大類：細(xì)胞興奮性腸毒素和細(xì)胞毒性腸毒素，細(xì)胞興奮性腸毒素刺激腸道加強(qiáng)分泌，細(xì)胞毒性腸毒素除有腸毒性外還有溶血性和細(xì)胞毒性，腸毒素與霍亂毒素（CT）可以引起交叉免疫反應(yīng)經(jīng)腸道免疫維氏氣單胞菌的蝙蝠能較強(qiáng)的抵抗CT的侵害作用細(xì)菌感染的先決條件是在粘附因子的幫助下定植于患者機(jī)體患病部位[2]。
維氏氣單胞菌的粘附因子包括菌毛、S層、莢膜、內(nèi)毒素（LPS）和外膜蛋白（OMPS），菌毛分為兩類：一是短的、堅(jiān)硬的菌毛（S/R）二是長(zhǎng)的、柔韌的菌毛（L/W）。量少的L/W菌毛更具粘附活性，是重要的凝血因子，LPS作為O抗原，把臨床分離到的菌株主要分為兩個(gè)血清型：O11和O34。O11血清型菌株可以產(chǎn)生S層，S層和莢膜能夠幫助菌體逃避宿主的免疫調(diào)理作用，引起易感動(dòng)物的敗血癥，莢膜還可以增強(qiáng)粘附素的粘附作用導(dǎo)致人類胃腸炎頻發(fā)，部分溫和生物型和全部維羅納生物型菌株屬O34血清型這類菌株在20℃時(shí)比在37℃時(shí)具有更強(qiáng)的致病性；OMPS是革蘭氏陰性菌外膜中的蛋白成分其數(shù)量、種類隨菌株不同而異，也可用于血清學(xué)分型困難時(shí)的細(xì)菌分型，維氏氣單胞菌的OMPS主要有OMP38和OMP48兩種是重要的毒力因子可以增強(qiáng)細(xì)菌的粘附作用，這些毒力因子在水產(chǎn)動(dòng)物、人類與畜禽感染中起著舉足輕重的作用，目前,對(duì)維氏氣單胞菌毒力基因的研究不多,且常為溫和型報(bào)道[3]。

1.1.3. 維氏氣單胞菌對(duì)水生動(dòng)物的危害
維氏氣單胞菌包括2個(gè)生物型，即溫和生物型和維羅納生物型，前者的致病性和傳染性較強(qiáng)，危害較大[4]，能感染鯉[5]、斑點(diǎn)叉尾鮰[6]、長(zhǎng)吻鮠[7]等多種魚類發(fā)病，臨床癥狀表現(xiàn)為體表出血、腹水等，是一種具有感染性的條件致病菌，并會(huì)引起人腹瀉、腦膜炎和敗血癥。在水體環(huán)境中維氏氣單胞菌廣泛存在，其繁殖速度在夏秋兩季最快，在水質(zhì)惡化、水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體創(chuàng)傷或免疫力降低時(shí)可以引起很高的死亡率。近些年來，國(guó)內(nèi)外關(guān)于維氏氣單胞菌的研究呈逐步增多，而且有關(guān)其致病性的報(bào)道也逐年增多。

1.2. 中草藥

1.2.1. 中草藥概況
我國(guó)的中草藥資源非常豐富，而且取材很也十分廣泛，具有一定的抗藥性，對(duì)于人體沒有毒副作用，將水產(chǎn)品投放到市場(chǎng)中售賣，也并不需要擔(dān)心人們的身體健康問題。重要的是，中草藥對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖中產(chǎn)生的病害也有很好的防治作用。中草藥中含有許多營(yíng)養(yǎng)元素，比如蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、常量元素以及多種微量元素等等。因此，開發(fā)毒副作用小、病原體不容易產(chǎn)生抗藥性的中草藥成為目前水產(chǎn)藥物研究的熱點(diǎn)之一。
1.2.2. 中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究現(xiàn)狀
隨著社會(huì)發(fā)展，人們對(duì)自身的健康越來越重視，對(duì)包括水產(chǎn)品在內(nèi)的食品安全要求越來越高，2017年6月22日，農(nóng)業(yè)部印發(fā)了《全國(guó)遏制動(dòng)物源細(xì)菌耐藥行動(dòng)計(jì)劃（2017～2020 年）》，明確獸用抗菌藥物減量化推進(jìn)、優(yōu)化獸用抗菌藥物品種[7]。有調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌性疾病的預(yù)防和治療最常用的方法就是名目繁多的抗生素，這會(huì)使病原菌激發(fā)極大的耐藥性，抗生素殘留更是有目共睹，水產(chǎn)品對(duì)人體的危害更是觸目驚心，由于濫用抗生素不僅會(huì)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境有毒副作用，也會(huì)危害動(dòng)物與人體健康[8]。抗生素的大量應(yīng)用和濫用，導(dǎo)致使病原菌的耐藥性增強(qiáng)，藥物的效果也越來越不明顯。而且鑒于我國(guó)水資源緊缺的現(xiàn)狀，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)一定要與資源和環(huán)境相協(xié)調(diào)，否則將難以為繼。要求大家在發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)的時(shí)候，要與環(huán)境相協(xié)調(diào)，保護(hù)環(huán)境，造福子孫后代。有研究表示，中草藥對(duì)人類和畜禽常見致病菌有較好的抑制作用，對(duì)不同的病原菌具有不同程度的抑菌作用[11]應(yīng)用中草藥診治動(dòng)物疾病，能夠在改善免疫力、抵抗力的同時(shí)，達(dá)到治標(biāo)又治本的效果，憑借這些優(yōu)點(diǎn)的中草藥被廣泛應(yīng)用于畜禽動(dòng)物臨床疾病治療中，并取得了良好的效果[9]。
中草藥作為中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中重要部分歷史源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，在魚類繁育及養(yǎng)殖中發(fā)揮著重要作用，具有藥源廣泛、成本低廉、易于提取、投喂方便、對(duì)養(yǎng)殖魚類和養(yǎng)殖水體的毒副作用在有效安全范圍內(nèi)，不受腸道消化影響，同時(shí)能夠有效避免水體相關(guān)環(huán)境影響，可增強(qiáng)機(jī)體免疫能力[13-14]。綜合這些優(yōu)點(diǎn)，中草藥的發(fā)展趨勢(shì)日益顯著[15-16]，廣泛并且深入地開展用于防治細(xì)菌性魚病的中草藥研究是非常有必要的。
1.2.3. 中草藥免疫作用機(jī)理
在水產(chǎn)養(yǎng)殖和飼料中使用中草藥可以控制原有微生物，提高水生動(dòng)物的免疫功能，從而減少疾病的發(fā)生。在此期間，由于中藥的成分過于復(fù)雜，中藥的功能過于廣泛，而且中藥的許多成分會(huì)相互作用，這大大增加了專業(yè)研究人員對(duì)中藥進(jìn)行具體研究的難度

目前，中草藥病理學(xué)的研究過程可分為三個(gè)基本層次:根據(jù)中草藥的化學(xué)成分，通過各種提取分離方法，最終獲得有效部位或單一組;根據(jù)中藥的基本性質(zhì)和臨床使用的具體作用，進(jìn)行最傳統(tǒng)的藥理分類;對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖中發(fā)生的病害進(jìn)行了全面的統(tǒng)計(jì)和總結(jié)，并采用分離培養(yǎng)的方法進(jìn)行了單方提取中草藥或復(fù)方提取抑菌試驗(yàn)。

比如很多中草藥中都會(huì)含有比較豐富的糖類，在實(shí)際水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中，研究較多的成分就是黃芪多糖、枸杞多糖與茯苓多糖等多種營(yíng)養(yǎng)成分。經(jīng)過科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，得出這幾種糖類能夠有效且快速地幫助水產(chǎn)生物形成抗體，其中NK細(xì)胞以及T·B淋巴細(xì)胞由抗體分泌在一定程度上增加，最終增強(qiáng)了水生生物對(duì)病害的抵抗能力。黃芪以及甘草等一些中草藥中含有豐富的皂甙，相關(guān)研究人員對(duì)皂甙進(jìn)行分析得出，皂甙能夠有效增加CGMP/CAMP的比值，能夠有效激活巨噬細(xì)胞，促進(jìn)T·B細(xì)胞對(duì)于分裂原的基本反應(yīng)，具有提升生物免疫力的重要作用，能夠進(jìn)一步提升網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬性基本功能。黃連素可與DNA形成復(fù)合物，抑制DNA的合成;黃柏能影響細(xì)菌的呼吸，抑制ＲNA的合成;金銀花可作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁，抑制細(xì)胞壁的合成;黃芪、艾蒿可刺激細(xì)胞產(chǎn)生干擾素，直接抑制或破原菌的增殖能力[17]。

1.2.4. 中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治中的應(yīng)用

目前，在水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)中，對(duì)于使用中草藥的效果進(jìn)行研究和分析，比較關(guān)注的方面是生物免疫力增強(qiáng)的方面。中草藥能夠提高水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的免疫力，追溯本源就是因?yàn)橹胁菟帉?duì)提升生物機(jī)體的免疫器官具有大的明顯的促進(jìn)作用，進(jìn)而可以有效提升生物的免疫力。所以針對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖的生物，其目的主要是增強(qiáng)免疫力途徑，通過加強(qiáng)生物的非特異性免疫反應(yīng)來增強(qiáng)其機(jī)體的免疫力，具體通過使生物的皮膚和血清以及身體內(nèi)的黏液中含有的溶酸酶活性得到進(jìn)一步增強(qiáng)而實(shí)現(xiàn)。中草藥很容易形成免疫的效果，最重要的是它含有多糖、有機(jī)酸有機(jī)酸和葡萄糖苷等成分，具有一定的揮發(fā)性作用，能有效提高水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的免疫力。相關(guān)工作人員可以進(jìn)行具體的實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步總結(jié)SOD酶和血清溶菌酶的活性，對(duì)生物體的生長(zhǎng)有很好的促進(jìn)作用。刺激水產(chǎn)養(yǎng)殖生物進(jìn)食的中草藥中有一部分，具有相對(duì)特殊的香氣，這樣的氣味可以刺激水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的食欲。比如八角和魚腥草等一些中草藥可以起到很好的誘魚作用。據(jù)相關(guān)研究，一些中草藥含有相對(duì)豐富的芳香族小分子有機(jī)酸，包括含氮化合物、脂類、醛類、酞類等。大蒜的氣味還能對(duì)魚的嗅覺產(chǎn)生一定的影響，促進(jìn)魚的食欲，使鰱魚和鳙魚等魚吃得更多。水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的給藥方法為遍灑法，方法是：先將中草藥搗碎，用水浸泡后，連渣帶汁全池潑灑，干草藥必須切碎后，煮一段時(shí)間再使用?？梢杂行Х乐尾《?、原蟲和致病性真菌感染。另外，還可以刺激水產(chǎn)養(yǎng)殖生物的進(jìn)食。

魚肉的不好會(huì)影響魚產(chǎn)品的銷售，將野魚與人工飼養(yǎng)的魚類相比，人工養(yǎng)的魚類的魚肉是明顯不如野魚類的。游離的氨基酸和不飽和脂肪酸影響等含量的浮動(dòng)會(huì)對(duì)魚類肉質(zhì)產(chǎn)生影響。在病害防止與治療的過程中，培育和繁殖工作人員可以通過使用中草藥在此生物的體內(nèi)行成一定的藥物沉淀，讓魚產(chǎn)品的肉質(zhì)提高;如果想讓魚產(chǎn)品蛋白質(zhì)提高脂肪率下降的話，比如可以加入一些杜仲葉粉在飼料里，提高肉的改良。

含有比較豐富的生物堿和黃酮等成分的中草藥可以，幫助水產(chǎn)養(yǎng)殖生物抵御細(xì)菌并治療疾病，能夠?qū)Σ≡⑸锸钟行У臍⒕蛞志Ч?。黃芪多糖作為中成藥投喂給草魚、鰱魚等，能夠?qū)︳~類腸道中的細(xì)菌結(jié)構(gòu)進(jìn)行一定改善，進(jìn)而促進(jìn)有益菌數(shù)量的增長(zhǎng)，增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體免疫力，提高水產(chǎn)動(dòng)物抗應(yīng)激能力，促進(jìn)魚類攝食、生長(zhǎng)，減少病害發(fā)生，提高經(jīng)濟(jì)效益。

1.3. 研究目的與意義

由于多年來中草藥具有副作用小、價(jià)格低廉、沒有殘留等特點(diǎn)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用越來越廣泛，并且在水產(chǎn)養(yǎng)殖中逐漸顯露出良好的應(yīng)用效果，因此尋找中草藥代替抗生素，依靠中草藥的抑菌治療作用解決魚類病害與預(yù)防問題成為了目前最可行的辦法。本研究對(duì)從患病羅氏沼蝦中分離的維氏氣單胞菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)，測(cè)定抑菌圈大小及最小抑菌濃度(MIC)，篩選出對(duì)維氏氣單胞菌敏感的中草藥，以期為維氏氣單胞菌的中藥防治提供依據(jù)。為了減少水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的壓力，本研究共篩選24種中草藥。本研究探討這24種中草藥對(duì)致病性維氏氣單胞菌體外抑菌活性，通過比較 24 種效果，對(duì)魚類的中草藥研究提供了科學(xué)的依據(jù)。

2. 實(shí)驗(yàn)材料和方法

2.1. 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)菌株為維氏氣單胞菌，菌株JDM1-1從患病羅氏沼蝦分離得到，保存于實(shí)驗(yàn)室-80℃冰箱。

試驗(yàn)用中草藥購(gòu)自同仁堂大藥房，名錄及其供試部位見表1。

2.2. 主要試劑和儀器?

超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱，高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫水浴鍋，電磁爐，普通固體培養(yǎng)基，普通液體培養(yǎng)基。

2.3. 中草藥提取物的制備

分別取用上述 24 種中草藥各50g加入 500 mL 無菌蒸餾水，液面浸過中草藥浸泡30 min 后煮沸沸后用文火再煮1 h用4層紗布過濾藥液收集濾液。藥渣加水 50 0mL 煮沸后煎 30 min 過濾藥液；合并兩次藥液，文火濃縮至50 mL (此時(shí)中草藥原藥濃度為 1 g/mL)，即為100%中草藥原液[18]。

2.4. 菌懸液的制備

取-80℃保存菌株JDM1-1，接種于LB固體培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng)24 h，以鉑絲環(huán)蘸取菌苔在瓊脂平板上三區(qū)劃線，培養(yǎng)16 h后挑取單個(gè)菌落接種于普通肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)16~18 h。培養(yǎng)后使用分光光度計(jì)測(cè)定其OD600以確定菌液濃度， 之后用普通肉湯培養(yǎng)基稀釋終濃度為107CFU/ml的應(yīng)用菌液[19]。

2.5. 抑菌圈的測(cè)定

采用平板挖洞法進(jìn)行中藥有效成分的體外抑菌試驗(yàn)。在超凈工作臺(tái)中，用直徑9 cm 培養(yǎng)皿，待培養(yǎng)基冷卻后在培養(yǎng)皿底部劃十字線，將培養(yǎng)皿等分為四個(gè)區(qū)域，用無菌的滴管加入0.1 mL的菌液到平板內(nèi)，濃度107CFU/ml，用無菌涂布棒涂滿平板表面，蓋好培養(yǎng)皿，在超凈工作臺(tái)中室溫下放置一會(huì)，待平板表面稍干用直徑為6 mm打孔器打4個(gè)大小一致的孔洞并在底部的相應(yīng)位置作好記號(hào)。在孔洞里分別加入30 ul中藥有效成分藥液，將平板放入4 ℃冰箱中讓藥液擴(kuò)散30 min后小心地平移到恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃培養(yǎng)24 h，每種中藥有效成分做3次重復(fù)，觀察其結(jié)果并測(cè)量各孔周圍抑菌圈直徑。

結(jié)果判定:觀察空洞周圍有無抑菌圈，用游標(biāo)卡尺量取其直徑(包括空洞直徑)大小，每孔取不同方向測(cè)量?jī)纱?，采用單因素方差分?4種中藥有效成分對(duì)3株細(xì)菌的體外抑菌圈直徑，最終求取三孔共六次測(cè)量結(jié)果的平均值，以毫米為單位記錄，結(jié)果以X+SD表示。按抑菌環(huán)直徑的大小報(bào)告極敏、高敏、中敏、低敏[20-21]。

2.6. 最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

根據(jù)平板打孔法的結(jié)果，選取抑菌圈直徑15.00 mm左右的中藥有效成分，采用二倍稀釋法，分別測(cè)定中藥有效成分對(duì)菌株JDM1-1的最小抑菌濃度。

取無菌肉湯培養(yǎng)基試管10支，于1~9管中各加入無菌肉湯培養(yǎng)基2 ml，然后于第1管中加入中藥有效成分液2ml，混勻后取出2ml加人第2管，依此類推，直到第8管中取出2ml棄去，第9管為普通肉湯培養(yǎng)基對(duì)照，第10管為中藥原液對(duì)照。然后1~9管加入供試菌液0.1 ml，搖勻，每種中藥有效成分做3次重復(fù)，置37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)18 h。在空白對(duì)照下，以眼睛觀察各個(gè)試管中以不發(fā)生渾濁變化的最高藥物稀釋倍數(shù)作為該藥物的最小抑菌濃度(Minimal Inhibition Concentration，簡(jiǎn)稱MIC) [22]。

2.7. 最小殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

在MIC試驗(yàn)基礎(chǔ)上將在清晰無菌生長(zhǎng)的試管用涂布棒蘸取營(yíng)養(yǎng)液分別涂布到相應(yīng)的瓊脂平板培養(yǎng)基，在28 ℃的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜 (24-48 h)，以瓊脂平板上菌落數(shù)不超5個(gè)的最低藥物濃度作為該藥物對(duì)該菌株的最小殺菌濃度 (Minimal Bacteriacidal Concentration，簡(jiǎn)稱MBC)。根據(jù)MIC值和MBC值評(píng)價(jià)中藥有效成分的體外抗菌活性[23]。

3. 結(jié)果

3.1. 抑菌圈測(cè)定結(jié)果

24種中草藥對(duì)病原菌體外抑菌結(jié)果見表2。

3.2. 最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定結(jié)果與最小殺菌濃度（MBC）測(cè)定結(jié)果?

經(jīng)過體外抑菌實(shí)驗(yàn)共篩選出7種中草藥具有較好的抑菌效果。這7種中草藥對(duì)維氏氣單胞菌的最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定結(jié)果與最小殺菌濃度（MBC）測(cè)定結(jié)果見表3。

表3? 7種中草藥對(duì)致病菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度

4. 討論?

近幾年來已經(jīng)有不少關(guān)于中草藥抑菌殺菌的研究報(bào)道，如馬志宏等用33種藥物對(duì)致病性維氏氣單胞菌進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，馬齒莧對(duì)維氏氣單胞菌有抑菌效果，張召興等的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)五味子對(duì)維氏氣單胞菌的抑菌效果最明顯[24-25]。朱成科的150種中草藥體外抑殺維氏氣單胞菌的研究中五倍子石榴皮、地榆和烏梅有不錯(cuò)的抑菌效果與本研究結(jié)果的一致[26]。龍繼兵等 80 種中草藥水提物中體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大黃對(duì)維氏氣單胞菌有抑菌效果，與本試驗(yàn)結(jié)果不一致[27]。其可能與感染動(dòng)物和維氏氣單胞菌致病性的不同以及通過傳代培養(yǎng)產(chǎn)生的變異有關(guān)。除此以外，由于不同產(chǎn)地的中草藥有效成分不同，以及中草藥加工、提取的方法不同，其對(duì)細(xì)菌的敏感性也存在一定的區(qū)別，這些都可能會(huì)造成結(jié)果存在差異。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在試驗(yàn)條件相同的情況下，石榴皮、五倍子、烏梅、地榆、白芍、木瓜因抑菌圈直徑均大于10 ?mm，表現(xiàn)為抑菌作用強(qiáng)。本試驗(yàn)抑菌圈直徑在 10 mm 以上，MIC 介于 15.63~31.25 mg/mL 之間有五倍子、烏梅抑菌殺菌效果最好。五倍子抑菌效果最好，，抑菌圈直徑達(dá) 11.58mm，最小抑菌濃度為 7.125 mg/mL，最小殺菌濃度為 31.25 mm。其次為烏梅抑菌圈直徑高 13.5 mm，最小抑菌濃度為 15.625 mg/mL，最小殺菌濃度為 31.25 mm。表明了烏梅等6種中草藥對(duì)預(yù)防和治療由維氏氣單胞菌引起水產(chǎn)動(dòng)物疾病具有良好的應(yīng)用前景。

?致謝

感謝導(dǎo)師

參考文獻(xiàn)

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