葡萄糖和 ATP測定丨艾美捷 Worthington葡萄糖-6-磷酸脫氫酶方案
葡萄糖-6-磷酸脫氫酶?(G6PD)?是一種調節(jié)酶,催化戊糖磷酸途徑的步:使用?NADP +和/或?NAD +氧化葡萄糖-6-磷酸。
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L. mesenteroides?的?G6PD?因其獨特的雙輔酶特異性而得到了非常詳細的研究。大多數脫氫酶更喜歡?NAD +或?NADP +,但?L. mesenteroides G6PD?都可以使用。
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艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脫氫酶特異性:
NAD?或?NADP?都可以作為輔酶,NAD?的內在反應速度大約是?NADP?的?1.8?倍(Olive?和?Levy 1967)。D-葡萄糖-6-磷酸被認為是天然底物,盡管?D-葡萄糖反應緩慢?(Metzger et al . 1972)。
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Asp177?和?His240?形成?G6PD?的催化二元組。His240?作為從?6-磷酸葡萄糖中提取?C-1?質子的堿基;Asp177?穩(wěn)定產生的正電荷?(Cosgrove et al . 1998)。
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作品:
L.mesenteroides G6PD?是相同亞基的二聚體,每個二聚體有兩個活性位點,假定位于輔酶結合位點和每個亞基中的大 β+α 結構域之間的口袋中(Rowland等,?1994)。這個口袋包含幾個完全保守的氨基酸,包括一個八殘基肽(Cosgrove et al . 1998)。
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分子特征:
L.?mesenteroides G6PD?基因編碼?485?個氨基酸的多肽。G6PD?的獨特之處在于它不含半胱氨酸殘基。已經確定了在生理條件下僅使用NADP +的人和大腸桿菌的序列。Z. mobili的序列與L. mesenteroides一樣可以使用?NADP +或?NAD +,也已確定。這些物種中的任何兩個之間大約有?30-36%?的序列同一性。一個保守的序列從?Arg175?開始,并含有一個賴氨酸殘基,被認為在葡萄糖-6-磷酸結合中起作用?(Lee et al . 1991)。
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艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的特性:
分子量:440,000 (Lee and Harpst 1973;?另見?Main et al . 1974)
組成:Lee?和?Harpst (1973)?指出?ButChE?是一種四聚體結構,具有相同大小的?110,000?道爾頓的亞基。它是一種糖蛋白。主要等人。(1974)?已經確定了氨基酸和碳水化合物的組成,基于?101,000?的顆粒重量。另見?Chiu等人。(1972?年)和帕夫利奇(1972?年)。
最佳?pH?值:6.0-8.0 (Augustinsson 1960)
消光系數:E 280 =13.6 (Main et al . 1974)
活化劑:Ca 2+和?Mg 2+ (Augustinsson 1960)
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艾美捷Worthington葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的應用:
1.測量?NADPH?或?NADH?的系統(tǒng)(Bhattacharya?和?Ali 1988)
2.葡萄糖和?ATP(與?HK?偶聯時)、果糖、6-磷酸葡萄糖、NAD(P) +和?CK的測定
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相關文獻:
1.Anderson, W.?和?Nordlie, R.: 酵母葡萄糖?6-脫氫酶的葡萄糖脫氫酶活性。I.?碳酸氫鹽、磷酸鹽和硫酸鹽的選擇性刺激?, Biochemistry 7 , 1479, 1968
2.Balaguer, P.、Terouanne, B.、Eliaou, J.、Humbert, M.、Boussioux, A.?和?Nicolas, J.: 使用葡萄糖?6-磷酸脫氫酶作為核酸雜交反應的新標記 , 肛門生化?180 , 50, 1989
3.Ben-Bassat, A.?和?Goldberg, I.: 來自甲醇生長的假單胞菌?c.的葡萄糖?6-磷酸脫氫酶?(NADP + /NAD + )?和?6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶?(NADP +/ NAD + )?的純化和性質。?, Biochim Biophys Acta 611 , 1, 1980
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Worthington主要研究覆蓋生物技術和生命科學研究,診斷,生物制藥和生物加工應用的高質量純化酶,蛋白質,核酸和試劑盒。艾美捷科技是Worthington的中國代理商,為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。