FISH原則與protocol（用于熒光顯微鏡檢測）
FISH原則
熒光原位雜交（FISH）是一種使用熒光探針的技術(shù)，該探針與染色體的特殊位點結(jié)合，與探針具有高度的序列互補性。 熒光探針是用熒光基團標記的核酸，可以與特定的 DNA/RNA 序列結(jié)合。 因此，我們可以通過檢測熒光基團來了解特定DNA序列在細胞中的位置和時間。 它是在 20 世紀 80 年代初開發(fā)的。 熒光顯微鏡可用于找出熒光探針與染色體結(jié)合的位置，流式細胞術(shù)可用于定量檢測結(jié)合。 此 FISH 協(xié)議適用于流式細胞術(shù)檢測和熒光顯微鏡檢測中使用的 Cy5 和 FAM 標記探針。
圖1.熒光原位雜交（FISH）示意圖。
FISH?protocol?（用于熒光顯微鏡檢測）
在 FISH 之前，通過用 500 μl 10% 中性緩沖福爾馬林覆蓋樣品接觸區(qū)域，標本在 25°C 下固定 30 分鐘。
固定后，福爾馬林被丟棄，標本在 1x 磷酸鹽緩沖鹽水 (PBS) 中清洗一次。
然后在雜交前將樣品在乙醇中脫水（50%、80% 和 95% (v/v) 系列，在每個濃度下暴露于 300 μl 乙醇 3 分鐘）。
標本在 55°C 下使用防潮密封的載玻片孵育室雜交 15 分鐘。 簡而言之，將 500 μl 體積的雜交緩沖液（0.7 M NaCl、0.1 M Tris [pH 8.0]、0.1% 十二烷基硫酸鈉、10 mM EDTA，含有探針，預熱至 55 oC）應用于標本和腔室的表面蓋子是密封的，在室內(nèi)創(chuàng)造一個潮濕、溫度可控的環(huán)境。
15 分鐘后，取下蓋子，用預熱至 55oC 的無探針雜交緩沖液短暫沖洗樣品。
標本上雜交細胞在黑暗中用含有 1.5 μg ml-1 4',6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) 的約 30 μl 封固劑進行復染 10 分鐘。
然后用蓋玻片固定標本并使用熒光顯微鏡檢查。
