通過辨別細(xì)胞生長狀態(tài)避免細(xì)胞死亡的方法技巧
原標(biāo)題：別讓細(xì)胞輕易 Go Die，幾招辨別細(xì)胞生長狀態(tài)
實驗汪在養(yǎng)細(xì)胞的時候，往往全部注意力都在細(xì)胞身上，全心全意地伺候著細(xì)胞主子，生怕一不小心就遭遇污染。
雖然要小心污染是沒錯，但要養(yǎng)好細(xì)胞，主子們的生長環(huán)境也應(yīng)時刻放在心上！
為了能更好地模擬體內(nèi)環(huán)境以保證細(xì)胞的增殖和分化，細(xì)胞生物學(xué)實驗對培養(yǎng)條件有著嚴(yán)格的要求。時刻了解細(xì)胞的生長環(huán)境以判斷其生長狀態(tài)，對于細(xì)胞培養(yǎng)相當(dāng)重要。
那么該怎樣判斷細(xì)胞狀態(tài)呢？“揣度圣意”可不能靠促膝談心，而是要依靠鏡檢。
? ? ?觀察你的細(xì)胞?? ??
在進(jìn)行任何操作的時候，都要在顯微鏡下檢查細(xì)胞狀態(tài)。
細(xì)胞持續(xù)在顯微鏡的監(jiān)控之下，才不會隨便搗亂。鏡檢不僅能看出細(xì)胞是否被污染，還能觀察到細(xì)胞的狀態(tài)，看看是不是朝著健康的方向發(fā)展。
今天小編?就以上面這張鏡檢結(jié)果圖為例，來跟大家聊聊細(xì)胞培養(yǎng)中的一些常見狀態(tài)。
A?細(xì)胞貼壁不均勻
真核細(xì)胞這些小家伙們同樣喜歡抱團(tuán)。在圓形培養(yǎng)皿或多孔板中培養(yǎng)時，細(xì)胞在接種后有集中在培養(yǎng)皿或多孔板中間的趨勢，不易均勻分散在培養(yǎng)器皿內(nèi)。
像上圖右上角 A 圈中的細(xì)胞分布就明顯地比左下方來得致密。這將會導(dǎo)致最后實驗檢測結(jié)果不均一，實驗可重復(fù)性差。
通常來說，發(fā)生這種情況的原因有以下幾點：
● 接種時細(xì)胞沒完全分開，有聚集；
● 培養(yǎng)表面不平坦；
● 接種密度不夠；
出現(xiàn)這樣的情況，可以采取下列措施：
● 將細(xì)胞充分打散；
● 接種時多點接種；
● 做密度梯度找合適接種密度；
● 購買高質(zhì)量的細(xì)胞耗材；
使用小孔徑的多孔板就一定要更加重視這個操作了，因為小孔徑的多孔板中培養(yǎng)液的流動一般不足以將細(xì)胞均勻地分散開來。
B?細(xì)胞顆?；蚩张?/strong>
B 圈中出現(xiàn)的現(xiàn)象可以判斷為形成了細(xì)胞顆?；虍a(chǎn)生了空泡。我們可以放大仔細(xì)觀察一下：
如果出現(xiàn)細(xì)胞顆粒，尤其是核周圍的顆粒增加，或者細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空氣泡，都暗示著細(xì)胞的狀態(tài)不太好，細(xì)胞的收獲率就會不如預(yù)期。
一般來說，出現(xiàn)這樣的狀態(tài)可以通過更換培養(yǎng)液來解決。但如果更換培養(yǎng)液也無濟(jì)于事的時候，就需要考慮是否存在微生物污染、細(xì)胞系衰老、培養(yǎng)基或血清不足等問題了。
C?氣泡干擾細(xì)胞貼壁
血清中含有大量蛋白，所以在用移液器進(jìn)行移液操作時很容易產(chǎn)生氣泡。氣泡會干擾細(xì)胞貼壁，導(dǎo)致細(xì)胞無法正常生長。
下圖中的大圈圈就是惱人的氣泡了。
產(chǎn)生氣泡多數(shù)是由于加液的方式不對，從培養(yǎng)皿中間加液、加液或吹打時速度太快都會形成氣泡。
正確的加液姿勢應(yīng)該是靠培養(yǎng)孔壁添加培養(yǎng)基，加液或吹打動作要緩慢。
D?細(xì)胞凋亡
細(xì)胞凋亡也是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的一個明顯信號。細(xì)胞死亡時會變成圓形，并從培養(yǎng)皿表面脫落懸浮在培養(yǎng)液中。
這個畫面，對于養(yǎng)啥死啥星人應(yīng)該很眼熟吧。
如果在培養(yǎng)過程中持續(xù)地觀察到細(xì)胞凋亡或壞死，就說明細(xì)胞培養(yǎng)的狀態(tài)很不好。
如果細(xì)胞接連凋亡，就要用凍存?zhèn)浞莸募?xì)胞替換現(xiàn)有的細(xì)胞系。在細(xì)胞復(fù)蘇的融化過程中，總有些扛不住壓力而死亡的細(xì)胞。因此需要在復(fù)蘇細(xì)胞接種一天后應(yīng)進(jìn)行一次換液以避免死細(xì)胞和毒性物質(zhì)在培養(yǎng)液中的累積。
E?細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂
細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂證明辛苦付出終于有了回報，你手頭的細(xì)胞主子們開始培育下一代了！
在細(xì)胞增殖的過程中，細(xì)胞會呈圓形并部分地從培養(yǎng)皿表面脫離，直到分裂成兩個子細(xì)胞后再次貼壁，并恢復(fù)其形態(tài)學(xué)特征。
給你的細(xì)胞們一點空間，他們會更樂意培養(yǎng)下一代。在細(xì)胞鋪滿 70-80% 的培養(yǎng)皿表面時進(jìn)行傳代效果會比較好，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)密度過高時細(xì)胞會停止增殖。
見識過了上述種種狀態(tài)，
是不是對細(xì)胞的培養(yǎng)條件有一些新的認(rèn)識呢？
只要在鏡檢之下進(jìn)行操作，細(xì)胞的各種小動作都逃不過實驗汪的法眼，只要理解了每個狀態(tài)出現(xiàn)的原因，仔細(xì)分析，就可以找到應(yīng)對策略。
來源：“Eppendorf實驗室?”公眾號，作者： 艾本德
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