葡萄球菌性骨髓炎動(dòng)物模型【動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代做】

【造模機(jī)制】70%~80%人類骨髓炎是由金黃色葡萄球菌引起的。細(xì)菌往往通過(guò)血源播散至骨骼（干骺端），炎癥急性期過(guò)后出現(xiàn)竇道、無(wú)效腔、死骨，在治療上十分困難。將一定量的葡萄球菌注人大鼠、雞、兔、狗、羊等動(dòng)物骨髓腔中均可引起骨髓炎，其發(fā)病過(guò)程和病理變化均與人類十分相似。本模型以兔為例介紹葡萄球菌性骨髓炎動(dòng)物模型。

【造模方法】先配制金黃色葡萄球菌懸液。將細(xì)菌室提供的菌種在肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)并傳代1次后，用比濁法配成密度為1×10°/ml細(xì)菌懸液，注入小鼠腹腔讓其增殖以恢復(fù)菌種毒力。24小時(shí)后將小鼠剖腹，取腹腔液，劃線接種于普通培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng) 24小時(shí),桃取純化菌種，在肉湯培養(yǎng)基中再傳代一次。造模前配成密度為3×10°/m1金黃色葡萄球菌懸液備用。造模取成年健康新西蘭白兔，常規(guī)麻醉,剪去前臂毛發(fā),碘酒酒精消毒，以橈骨中下1/3處為中心，取前臂外側(cè)縱向切口長(zhǎng)約1cm，逐層切開(kāi)，顯露橈骨，用電鉆在橈骨上鉆一個(gè)直徑為 0.3cm小圓洞,放出部分骨髓。將 10°~10°葡萄球菌注人骨髓腔內(nèi)(注射針頭彎成鉤狀穿入骨髓腔內(nèi)0.5cm)，拔出針頭后立即用骨蠟封死鉆孔，以免注射菌液及骨髓溢出骨髓腔，閉合傷口。也可在兔股骨和脛骨制造骨髓炎模型。股骨切口在股骨第三轉(zhuǎn)子下0.3～1.0cm處,脛骨切口在距脛骨平臺(tái)0.5～1.5cm 之間的脛骨前內(nèi)側(cè)骨面，做 1cm 大小的切口，顯露骨面，直接用骨髓穿刺針穿插入髓腔，注射菌量同上，立即用骨蠟封死入口，閉合傷口。造模后分別在1周、2周、4周、8周取材做病理學(xué)檢查，觀察骨髓炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

主要觀察指標(biāo)有：①肉眼觀察患肢腫脹和竇道形成情況以評(píng)價(jià)炎癥進(jìn)展及治療效果;②拍攝患肢X線平片觀察骨骼破壞及修復(fù)情況，并可通過(guò)計(jì)算機(jī)測(cè)定髓腔破壞面積，計(jì)算其無(wú)效腔面積在治療前后的變化；③病理觀察以下情況：病灶內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，膿腫形成，死骨的大小和數(shù)量等情況；膿腫周圍肉芽組織包裹，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)種類與分布，肉芽組織外周接近骨皮質(zhì)區(qū)，成骨細(xì)胞增生，形成軟骨樣組織及新生骨組織的情況；炎癥穿破骨組織形成竇道向軟組織蔓延情況。

【模型特點(diǎn)】條件適宜時(shí)，葡萄球菌一般每20~30分鐘分裂一次，注入骨髓腔中的細(xì)菌短期內(nèi)將大量繁殖。12小時(shí)后骨髓腔內(nèi)形成膿腫，8~10天內(nèi)死骨形成，以后逐漸形成無(wú)效腔并有新骨形成，4周后局部相繼潰破流膿，形成竇道。X線片顯示造模骨端骨膜增生，髓腔中心骨質(zhì)破壞,均有無(wú)效腔和死骨存在，符合慢性骨髓炎臨床征象。若不經(jīng)治療約半數(shù)的動(dòng)物可能因感染擴(kuò)散而死亡，必要時(shí)可切開(kāi)引流，抗生素治療。

【應(yīng)用范圍】本模型用于急性骨髓炎的發(fā)病機(jī)制、慢性骨髓炎的病理過(guò)程研究；也用于不同方法，如手術(shù)及各種藥物制劑治療骨髓炎的療效和治療機(jī)制探索。

【注意事項(xiàng)】

1.接種的細(xì)菌數(shù)量要足夠，每只動(dòng)物注入的細(xì)菌數(shù)量也要盡量一致細(xì)菌懸液濃度過(guò)低（<1×10°/ml），造模成功率較低；濃度過(guò)高（>3×10°/ml)動(dòng)物死亡率太高，選用細(xì)菌濃度為（1~3）×10°/ml造模較佳。此外，細(xì)菌毒力強(qiáng)弱是造模成敗的關(guān)鍵因素，目前細(xì)菌庫(kù)菌種大都在培養(yǎng)基中反復(fù)傳代，毒力大減,因此,使用前將菌種注入活體動(dòng)物(如小鼠)體內(nèi)，繁殖1~2代，以恢復(fù)或增加其毒力。

2.若觀察過(guò)程中動(dòng)物狀態(tài)不佳，可行患肢髓腔鉆孔引流及給予抗生素治療，以緩解病情，延長(zhǎng)動(dòng)物生命。

【模型評(píng)價(jià)】本模型有較高的成功率（>86%），應(yīng)用廣泛。

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