急性腎衰竭動(dòng)物模型【疾病動(dòng)物模型代做】

【造模機(jī)制】油酸是一種具有較強(qiáng)毒性作用的脂肪,左腎動(dòng)脈注射油酸后,引起腎小管上皮細(xì)胞腫脹,壞死,間質(zhì)水腫,腎內(nèi)血管缺血,腎微循環(huán)嚴(yán)重障礙,腎臟排泄功能衰竭,形成急性腎衰竭。

【造模方法】

1.動(dòng)物和試劑選用 Wistar 雄性大鼠,體重 180～250g。油酸由北京 89942 部隊(duì)試劑廠生產(chǎn)。溴代苯及氯化三苯基四氮唑(TTC)均由北京化工廠生產(chǎn)。

2.模型制備將大鼠隨機(jī)分成 5 組,生理鹽水對照組,大鼠左腎動(dòng)脈注射生理鹽水0.45ml/kg;油酸Ⅰ組、油酸Ⅱ組、油酸Ⅲ組、油酸I組,大鼠左腎動(dòng)脈分別注射油酸 0. 05ml、0.1ml.0.125ml.0.15ml/kg。為了確保注射油酸時(shí)劑量的準(zhǔn)確,用植物油稀釋油酸。預(yù)試結(jié)果表明,單純植物油組(0.45ml/kg)與生理鹽水組無明顯差別。

3.樣本采集和指標(biāo)測定在左腎動(dòng)脈注射油酸后 10 分鐘.6 小時(shí)及 24 小時(shí)分別取材,用 Fishbein 報(bào)道的 TTC染色技術(shù)觀察腎 TTC 顯色的改變。常規(guī)法制備電鏡及光鏡切片,用 400T 透射電鏡觀察腎小球及小管周圍毛細(xì)血管超微結(jié)構(gòu)。在光鏡下,每張切片觀察 10個(gè)高倍視野,同時(shí)對腎小管壞死及腎小管管型以 0 個(gè)/HP 為(-),1~2個(gè)/HP 為(十),3~4個(gè)/HP 為(十十),大于4 個(gè)/HP 為(十十十)的計(jì)數(shù),對右腎,肺,心、腦、肝、小腸、睪丸也進(jìn)行了光鏡觀察。用阻抗法描記左腎動(dòng)脈注射油酸后 10 分鐘、1 小時(shí)及 6 小時(shí)左腎容積脈波的變化。用美國 IL 公司 MCA 微量離心式生化分析儀測定了注射油酸后 24 小時(shí)血清尿素氮和肌酐。

【模型特點(diǎn)】注射油酸后,腎微循環(huán)嚴(yán)重障礙,使腎小球?yàn)V過和腎小管分泌、重吸收功能均受到損傷,引起腎臟排泄功能的衰竭。

1.腎微血管超微結(jié)構(gòu)的改變左腎動(dòng)脈注射油酸 0.15ml/kg 后 10 分鐘,腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞界限不清,核染色質(zhì)高度聚集呈團(tuán)塊狀,核膜部分消失,線粒體腫脹,基底膜局部增厚。注射后 6 小時(shí),上述改變加重,可見內(nèi)皮細(xì)胞核碎裂,嚴(yán)重者可見內(nèi)皮細(xì)胞崩解。抽酸注射后 24 小時(shí),腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞核固縮、核碎裂,核溶解,內(nèi)皮細(xì)胞崩解,基底膜破壞。

2.腎組織結(jié)構(gòu)的改變腎組織結(jié)構(gòu)的改變依注射油酸劑量的不同而有不同。油酸1~N組可見腎小管壞死,油酸Ⅱ~N組又可見腎小球腫脹,甚至腎小球細(xì)胞核消失,胞漿紅染,結(jié)構(gòu)破壞,其程度隨注射油酸劑量的加大而加重。

3. TTC顯色的改變 TTC顯色后呈蒼白色,而正常情況下則呈鮮紅色。各組右腎顯示鮮紅色。左腎顯色與油酸作用時(shí)間有關(guān),依注射油酸劑量的不同而有區(qū)別。陽性者呈灶性不顯色蒼白區(qū),多分布于皮質(zhì)及外髓質(zhì),嚴(yán)重者累及整個(gè)腎切面。

4.阻抗式腎容積脈波的改變，注射油酸后 10 分鐘、1 小時(shí)及 6 小時(shí)均可見低平及平頂波,波高分別為注前的 34%,32%、32%;比對照組降低了 65%,68%及 66％。表明腎內(nèi)動(dòng)脈血管彈性降低,緊張度增高,周圍阻力增加,腎組織血液灌流量明顯減少。

5.血清尿素氮及肌酐的改變，血清尿素氮值依注射油酸劑量的不同而有差別。油酸IV組明顯高于其他各組。各組間血清肌酐無明顯差別。

【應(yīng)用范圍】研究急性腎衰竭發(fā)病機(jī)制和治療方法。特別對腎微循環(huán)障礙對該病發(fā)病的關(guān)鍵作用,以及微循環(huán)、腎間質(zhì)、腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞的改變間關(guān)系研究。

【注意事項(xiàng)】

1.要準(zhǔn)確選擇油酸的造模劑量從模型典型、穩(wěn)定看應(yīng)選用 0.15ml/kg 劑量。為了保證油酸注射劑量準(zhǔn)確,應(yīng)用植物油稀釋。

2.造模后觀察應(yīng)以微循環(huán)障礙為其特點(diǎn)并對應(yīng)地觀察腎間質(zhì),實(shí)質(zhì)的病理改變,抓住微循環(huán)改變對腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞影響的主線。

【模型評估】本模型是以嚴(yán)重的腎微循環(huán)障礙為特點(diǎn),合并間質(zhì)、實(shí)質(zhì)的損傷,可用于模擬人類起源于腎微循環(huán)障礙的急性腎衰竭。

ARF 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,最常用的有五種:腎動(dòng)脈夾閉、腎動(dòng)脈直接輸注去甲腎上腺素、甘油肌注,氯化汞及硝酸鈾靜脈注射。這些模型都不同程度地豐富了人們對 ARF 發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識,但多用于實(shí)質(zhì)細(xì)胞方面的研究。本模型從左腎動(dòng)脈注射油酸引起了腎微循環(huán)及實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損傷,建立了大鼠 ARF 模型,與上述五種模型比較,本模型是單側(cè)腎微循環(huán)障礙為主合并腎實(shí)質(zhì)嚴(yán)重?fù)p傷的一種新的 ARF 模型。

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