安諾倫代理Lumiprobe——ProteOrange蛋白質(zhì)定量試劑盒
自 2006 年以來,Lumiprobe生產(chǎn)和銷售用于生命科學(xué)研究和診斷的先進(jìn)化學(xué)品。產(chǎn)品目錄包括熒光染料、用于寡核苷酸合成的亞磷酰胺、點(diǎn)擊化學(xué)品和其他試劑。
ProteOrange 蛋白質(zhì)定量試劑盒
使用熒光染料的 ProteOrange 試劑盒可實(shí)現(xiàn)比分光光度法和其他用于蛋白質(zhì)定量的傳統(tǒng)方法(Lowry、Bradford、BCA)更高的靈敏度進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。
ProteOrange 試劑是試劑盒的關(guān)鍵成分,其游離形式幾乎不顯示熒光。在溶液中,它與蛋白質(zhì)分子形成復(fù)合物,并在與蛋白質(zhì)結(jié)合后表現(xiàn)出增強(qiáng)的熒光。ProteOrange 與蛋白質(zhì)復(fù)合物中的激發(fā)最大值為 ~485 nm,發(fā)射最大值為 ~590 nm。該試劑盒可與任何具有合適激發(fā)源和檢測(cè)通道的熒光計(jì)一起使用。一般來說,測(cè)量蛋白質(zhì)濃度的工作范圍受到設(shè)備靈敏度的限制。對(duì)于比色皿熒光計(jì),建議的可測(cè)量濃度范圍為 10 ng/mL 至 10 μg/mL;對(duì)于平板熒光計(jì),建議的可測(cè)量濃度范圍為 100 ng/mL 至 10 μg/mL。
該試劑盒包含 ProteOrange 熒光染料、用于制備染料工作溶液的緩沖液和蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品(BSA,2 mg/mL)。為了定量測(cè)試蛋白質(zhì),制備染料工作溶液并用它稀釋測(cè)試樣品和已知蛋白質(zhì)濃度的樣品以生成校準(zhǔn)曲線。使用試劑盒中的牛血清白蛋白或與測(cè)試樣品中相同的實(shí)驗(yàn)蛋白(如果有)制備蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品。將準(zhǔn)備好的樣品在 95 °C 下孵育 10 分鐘以使蛋白質(zhì)變性,讓其冷卻至室溫并測(cè)量熒光強(qiáng)度。
根據(jù)樣品體積的不同,測(cè)量次數(shù)從 200(標(biāo)準(zhǔn)熒光比色皿的樣品體積 2.5 mL 和測(cè)定體積 2 mL)到 2000(96 孔板的樣品體積 250 μL 和測(cè)定體積 200 μL)不等。
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