高效轉(zhuǎn)染病毒

源井生物可以提供不同質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的慢病毒，腺病毒，腺相關(guān)病毒。在基因編輯方面，源井生物可以提供體外細(xì)胞感染用的濃縮病毒，也可以提供動(dòng)物體內(nèi)使用的超純化病毒，滿足客戶的不同科研需求。

三種病毒的比對(duì):

慢病毒包裝原理

慢病毒（Lentivirus）載體是以 HIV-1 （人類免疫缺陷1型病毒）為基礎(chǔ)，使用皰疹病毒VSVG外殼蛋白發(fā)展起來的工具載體。其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。慢病毒具有感染譜廣泛特點(diǎn)，并且可以有效感染分裂和非分裂細(xì)胞。一經(jīng)感染宿主細(xì)胞，慢病毒即利用反轉(zhuǎn)錄酶將其RNA轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA，隨后永久的整合到宿主細(xì)胞的染色體中，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)。

此外，慢病毒免疫原性低，不易造成免疫反應(yīng)，所以現(xiàn)在慢病毒系統(tǒng)除了被廣泛應(yīng)用到各種細(xì)胞系的基因敲除/敲入、基因過表達(dá)、RNA干擾、microRNA研究，還大量應(yīng)用于活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中。

產(chǎn)品規(guī)格

服務(wù)流程及質(zhì)量控制：

有關(guān)慢病毒的FAQ

1、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞后多久才會(huì)表達(dá)？

Lentivirus表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)，但在一般代謝較旺盛的細(xì)胞（如293T，HEK293等）上，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)24小時(shí)后可以觀察到熒光；代謝比較緩慢的細(xì)胞（如原代培養(yǎng)細(xì)胞，神經(jīng)干細(xì)胞，胚胎干細(xì)胞等）熒光蛋白表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)，轉(zhuǎn)導(dǎo)后72-96小時(shí)甚至更長(zhǎng)時(shí)間才可以觀察到熒光。轉(zhuǎn)導(dǎo)后的細(xì)胞可以連續(xù)培養(yǎng)一周，通過觀察熒光的表達(dá)時(shí)間和表達(dá)強(qiáng)度來確定病毒對(duì)目的細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)情況。

2、慢病毒對(duì)目的細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率很低，如何提高病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率？

確保轉(zhuǎn)導(dǎo)之前細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)；可以使用易感細(xì)胞如293T進(jìn)行滴度測(cè)試，驗(yàn)證病毒液滴度是否出現(xiàn)大幅下降；適當(dāng)提高病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的MOI值和延長(zhǎng)轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)間。

3、慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后，細(xì)胞狀態(tài)很差甚至出現(xiàn)大量死亡，如何解決？

轉(zhuǎn)導(dǎo)前細(xì)胞狀態(tài)不佳，加入病毒量太大，病毒攜帶的目的基因含有細(xì)胞毒性均有可能導(dǎo)致目的細(xì)胞狀態(tài)異常，解決方法主要有：

（1）穩(wěn)定轉(zhuǎn)導(dǎo)前細(xì)胞狀態(tài)；

（2）降低病毒加入量，降低MOI值， 驗(yàn)證目的基因的細(xì)胞毒性；

（3）轉(zhuǎn)導(dǎo)6小時(shí)后觀察細(xì)胞，如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)異常時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基，若無(wú)則24小時(shí)后更換。

基因敲除慢病毒

源井生物構(gòu)建慢病毒敲除載體并包裝為慢病毒，細(xì)胞感染慢病毒后，可穩(wěn)定表達(dá)gRNA和Cas9蛋白，達(dá)到敲除靶基因的目的。

基因敲除慢病毒載體選擇:?