調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（T-Reg細(xì)胞）是一種特殊的T細(xì)胞系，對(duì)控制自身耐受和炎癥反應(yīng)至關(guān)重要。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)于調(diào)節(jié)免疫穩(wěn)態(tài)和抑制不同疾病環(huán)境中的免疫反應(yīng)具有至關(guān)重要的作用，它能通過抑制CD4+輔助性T細(xì)胞和CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞的激活和分化，對(duì)自體和腫瘤表達(dá)的抗原產(chǎn)生反應(yīng)性。Treg細(xì)胞表達(dá)特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，因而，CD4+CD25+Foxp3+被認(rèn)為是Treg細(xì)胞的經(jīng)典標(biāo)記組合。

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但是問題來了，選什么亞型，選什么來源，選什么熒光？

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說到這兒，想必大家都很想知道，CD4+CD25+FOXP3+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測試劑盒（TregFlowEx Kit）#ED7417能否解決這一難題呢？

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CD4+CD25+FOXP3+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測試劑盒反應(yīng)種屬：人；應(yīng)用類型：流式細(xì)胞術(shù)，F(xiàn)C；原理：?用于流式細(xì)胞術(shù)檢測人外周血或臍帶血中的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Treg (CD4 + CD25 + FOXP3 +)的百分比。

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CD4+CD25+FOXP3+Treg調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測試劑盒組分：固定與裂解液、破膜劑、封閉緩沖液、CD4-FITC/CD25-PE抗體預(yù)混液，以及FOXP3-APC抗體。

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實(shí)驗(yàn)流程如下：

1.表面染色：

1.1在試管中添加10μl CD4 FITC/CD25 PE試劑。

1.2添加100μl人血。

1.3混合均勻，在冰箱（2?8℃）的黑暗中孵育10分鐘。

1.4（可選清洗）洗滌池，加入2mL冷PBS，在300 g下離心5分鐘，4℃。

1.5吸入上清液，立即進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)染色。

2.細(xì)胞內(nèi)染色

2.1加入1mL稀釋的冷固定和溶解液。

2.2混合并在冰箱（2?8℃）黑暗中孵育10分鐘。

2.3添加0.5mL滲透溶液。

2.4混合并在冰箱（2?8℃）黑暗中孵育10分鐘。

2.5在400 g條件下，4℃下將細(xì)胞離心5分鐘。（離心前，請(qǐng)勿在固定/燙發(fā)混合物中添加任何其他緩沖液）

2.6去除（脫蠟）上清液。

2.7添加50μL冷阻緩沖液。

2.8添加50μL冷PBS。

2.9混合并在冰箱（2?8℃）的黑暗中孵育5分鐘。

2.10加入5μl FoxP3 APC試劑。

2.11混合并在冰箱（2?8℃）的黑暗中孵育30分鐘。

2.12.?用2ml冷PBS沖洗細(xì)胞兩次，在400 g下離心5分鐘，4℃。吸入/脫出上清液。

2.13.?在PBS中加入300μl 1%甲醛，并將染色樣品存放在2?8℃下，直到流式細(xì)胞儀測定。4小時(shí)內(nèi)分析處理樣品。

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結(jié)果展示：

使用TregFlowEx試劑盒中對(duì)人CD4陽性淋巴細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)多色染色。?Treg細(xì)胞（CD4 + CD25 + FOXP3 +）位于右上象限。

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文章來源：https://www.amyjet.com/featured/treg.shtml