什么是BCECF？

BCECF 是一種對 pH 非常敏感 (pH-sensitive) 的熒光素，是應用最廣泛的熒光 pH 傳感器。 pKa 為 6.97，接近生理 pH 值。BCECF 應用于測量淋巴細胞中細胞質 pH值 的熒光指示劑。BCECF 允許測量生理 pH 值范圍在 6.0-8.0 之間。激發(fā)波長: 490/440 nm; 發(fā)射強度: 535 nm。

BCECF理化性質

中文名：2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光素（85138-49-4）;BCECF酸；BCECF PH指示劑

英文名：BCECF;BCECF pH Indicators；BCECF Acid pH indicator；PH Sensitive Dye；pH-sensitive Fluorescein Dye

CAS號：85138-49-4

SMILES：c1cc(c(cc1C(=O)O)c2c3cc(c(cc3oc-4cc(=O)c(cc24)CCC(=O)O)O)CCC(=O)O)C(=O)O

Inchi：InChI=1S/C27H20O11/c28-19-10-21-17(7-12(19)2-5-23(30)31)25(16-9-14(26(34)35)1-4-15(16)27(36)37)18-8-13(3-6-24(32)33)20(29)11-22(18)38-21/h1,4,7-11,28H,2-3,5-6H2,(H,30,31)(H,32,33)(H,34,35)(H,36,37)

InchiKey：DKROGDOAOXDINY-UHFFFAOYSA-N

分子式 ：C27H20O11

分子量 ：520.44

閃點 ：318.3±27.8 °C

沸點：936.2±65.0 °C at 760 mmHg

極化度：49.8±0.5 10-24cm3

密度 ：1.6700

溶解度：SolubilitySoluble in water (slightly), DMSO, DMF, and methanol.

性狀：Solid，power

儲藏條件：-20°C；BCECF儲備液：在-80°C 儲存時，請在 6 個月內使用，-20°C 儲存1個月。

BCECF光譜?（?pH 5.5 and pH 9.0）

BCECF使用方法

1. 儲存液的配制
加入高質量無水DMSO將其配制成1-20 mM的儲存液。建議使用前進行配制，暫時不用的儲存液務必按照每次使用量分裝后于≤-20℃避光凍存。避免反復凍融?。。?br/>2. 染色步驟
※ 細胞準備
按照96孔板每孔100 uL 4～8×104個細胞，384孔板每孔25 uL1～2×104個細胞對細胞進行鋪板使其過夜生長。
備注：對于不同的細胞需參照文獻對細胞密度進行優(yōu)化調整。
※ BCECF 工作液的配制
根據(jù)具體使用量，取適量上述配制的儲存液，用HHBS（Hanks and 20 mM Hepes buffer）緩沖液稀釋成2-50 μM工作液。
※ 染色
分別加入等體積的BCECF,AM染液（96孔板，每孔加入100 μL; 384孔板每孔加入25 μL），于37℃細胞培養(yǎng)箱內孵育30-60 min。
注：a. 染色液中不能含有血清，因為血清中可能含有內源性酯酶活性，因此應避免；
? ? ? b. 染色液中不能含有氨基酸，因為存在的脂胺可能會斷裂AM基團，阻止染料的加載。
※ 清洗
吸除染液，用HHBS清洗細胞2次。
※??加入適當量復合物后觀察熒光強度變化。
使用合適熒光顯微鏡或帶有圖像分析系統(tǒng)的激光共聚焦顯微鏡檢測細胞的熒光強度?？捎?90 nm、430 nm激發(fā)波長，530 nm發(fā)射波長對其進行比率測定。

BCECF的實驗案例

(A) BCECF 的化學式。 (B) 用 BCECF 染色的皮膚組織的終生圖像（數(shù)據(jù)由舊金山大學的 Theodora Mauro、Zeiss LSM 510 NLO 和 bh SPC-830 提供）。 壽命是pH的指標。 （C 和 D）BCECF 的熒光壽命隨 pH 值而變化，并定義了細胞間脂質中人工角質層表面的較低 pH 值（改編自 Niesner 等人 [92]）。