QuickTiter逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒提供了一種測定逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度的快速方法。該測定法測量逆轉(zhuǎn)錄病毒的病毒核酸含量，可以在純化病毒之前或之后進(jìn)行。

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Cell Biolabs艾美捷QuickTiter? 逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒不涉及細(xì)胞感染；相反，它專門測量純化病毒或未純化病毒的病毒核酸含量上清液樣品（參見測試原理）。在未純化的病毒上清液的情況下，試劑盒是特別適用于在轉(zhuǎn)導(dǎo)步驟之前測定上清液滴度。該套件有檢測靈敏度極限為1.5 X 109病毒顆粒（VP）/mL，足以滿足中高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒樣本。整個過程大約需要60分鐘。每個試劑盒都提供足夠的試劑執(zhí)行20次測試。QuickTiter? 逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒提供了一種快速定量的有效系統(tǒng)病毒上清液和純化病毒的逆轉(zhuǎn)錄病毒滴度。

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Cell Biolabs艾美捷QuickTiter??逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒測定原理：

1.核酸消化

2.病毒下拉

3.蛋白質(zhì)變性和病毒基因組釋放

4.定量

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Cell Biolabs逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒組件：

1. QuickTiter? Solution A (Part No. 40020): One tube – 200 μL.

2. QuickTiter? Retrovirus Solution B1 (Part No. 312001): One tube – 800 μL.

3. QuickTiter? Retrovirus Solution B2 (Part No. 312002): One tube – 800 μL.

4. QuickTiter? Solution C (2X) (Part No. 40023): Two tubes – 1.5 mL each

5. CyQuant? GR Dye (400X) (Part No. 105101): One tube – 50 μL.

6. QuickTiter? Retrovirus RNA Standard (Part No. 312003): One tube – 500 μL containing 200

μg/mL retrovirus RNA Standard

存儲：將所有套件組件儲存在4oC。

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試劑的制備：

?1X快速滴定儀??解決方案C：準(zhǔn)備1X快速滴定儀??通過稀釋提供的2X溶液C在去離子水中貯存1:2。在室溫下儲存稀釋溶液。

?1X CyQuant?GR染料：根據(jù)包括逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)樣品的測定數(shù)量。使用前立即準(zhǔn)備1X CyQuant?GR染料，將提供的400X原液在1X TE中稀釋1:400。為了獲得最佳結(jié)果稀釋溶液應(yīng)在制備2小時后使用。

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標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：

1.?創(chuàng)建200μg/mL、100μg/mL，50μg/mL和25μg/mL的逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)，…0μg/mL（1:2系列稀釋），標(biāo)記9個微離心管#1至#9。

2.添加20μL 1X快速滴定儀??溶液C至2號管至9號管，轉(zhuǎn)移20μL 200μg/mL快速滴定儀??逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)品至1號管和2號管。充分混合2號管，轉(zhuǎn)移20μL將混合物（100μg/mL）輸送至下一管。重復(fù)8號管的步驟，并將9號管用作坯料。

3.將每種稀釋液（包括空白）5μL轉(zhuǎn)移至適用于熒光計的微量滴定板上。添加將95μL 1X CyQuant?GR染料注入含有5μL樣品的每個孔中。其中熒光板讀取器使用480/520nm濾光片組。

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結(jié)果示例：

下圖顯示了典型的定量結(jié)果。應(yīng)使用以下數(shù)據(jù)僅供參考。該數(shù)據(jù)不應(yīng)用于解釋實際結(jié)果。

圖：逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)曲線?？焖俚味▋x? 逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA標(biāo)準(zhǔn)按照上述說明稀釋。熒光測量在SpectraMax Gemini XS熒光計（分子器件），帶485/538 nm濾光片組和530 nm切斷