蛋白質(zhì)印跡（簡介、步驟）
什么是蛋白質(zhì)印跡
蛋白質(zhì)印跡是一種雜交技術(shù)，用于檢測樣品中的特定蛋白質(zhì)。它也被稱為免疫印跡，因?yàn)樵摷夹g(shù)使用抗體來標(biāo)記感興趣的蛋白質(zhì)和檢測抗體標(biāo)記的蛋白質(zhì)。
圖1：蛋白質(zhì)印跡
蛋白質(zhì)印跡最初是由Towbin于1979年開發(fā)的，目前已被用作蛋白質(zhì)分析的常規(guī)技術(shù)。
蛋白質(zhì)印跡如何進(jìn)行？
蛋白質(zhì)印跡主要用于檢測樣品中的特定蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)印跡技術(shù)的步驟如下所述。
蛋白質(zhì)樣品根據(jù)其大小通過SDS-PAGE進(jìn)行分離。
將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上 – 將大小分餾的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝化纖維素或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜中。這種轉(zhuǎn)移所涉及的技術(shù)是擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。
阻斷非特異性位點(diǎn) – 膜上未被占用的位點(diǎn)被阻斷，以防止蛋白質(zhì)的非特異性結(jié)合。脫脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）可用于此目的。
一抗孵育 – 將封閉的膜與一抗溶液一起孵育。這些一抗與膜上的特定蛋白質(zhì)結(jié)合。
二抗孵育 – 膜與二抗一起孵育，二抗與一抗結(jié)合。二抗與報告蛋白偶聯(lián)。這些報告蛋白可以是生物素、堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。
通過顯色進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測 – 偶聯(lián)酶報告基因與其底物反應(yīng)，生成有色堿性磷酸酶，將 BCIP 轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，而辣根過氧化物酶轉(zhuǎn)換魯米諾，發(fā)光。
圖2：蛋白質(zhì)印跡 – 步驟
結(jié)論
蛋白質(zhì)印跡是一種雜交技術(shù)，用于檢測樣品中是否存在特定蛋白質(zhì)。它使用SDS-PAGE根據(jù)其大小和與一抗的結(jié)合來分離蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)可以在顏色發(fā)育過程中被二抗識別。
