觀察類實(shí)驗(yàn)

用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)-一個(gè)實(shí)驗(yàn)

[原理]葉肉細(xì)胞中的葉綠體呈綠色、扁平的橢球或球形，不需要染色，制片后直接觀察

[目的]使用高倍顯微鏡觀察葉綠體的形態(tài)、分布，活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷流動(dòng)狀態(tài)，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)可用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中葉綠體的運(yùn)動(dòng)作為標(biāo)志

[材料]蘚類葉，新鮮的黑藻(首選二者）

或菠菜葉、番薯葉等-便宜，但必須稍帶下表皮葉肉，但不能用上表皮

[步驟]觀察葉綠體:

(1)制作蘚類葉片臨時(shí)裝片:在潔凈的載玻片中央滴一滴清水，用鑷子取一片蘚類的小葉或者取菠菜葉稍帶些葉肉的下表皮。放入水滴中，蓋上蓋玻片。

(2)將制作好的葉片臨時(shí)裝片放在低倍顯微鏡下觀察，找到葉肉細(xì)胞后，換用高倍顯微鏡，仔細(xì)觀察葉肉細(xì)胞內(nèi)葉綠體的形態(tài)和分布觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)供觀察用的黑藻，事先應(yīng)放在光照、室溫條件下培養(yǎng)，從新鮮黑藻枝上取一片柔嫩的小葉放在載玻片水滴中，蓋上蓋玻片，先用低倍鏡觀察，后用高倍鏡觀察，注意觀察葉綠體隨細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的情況

注：臨時(shí)裝片時(shí)刻有水，失水葉綠體移動(dòng)范圍受限制，嚴(yán)重脫水細(xì)胞死亡

實(shí)驗(yàn)前先把黑藻放在光照室溫下培養(yǎng)，利于細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)

強(qiáng)光：葉綠體橢球體側(cè)面，避免被灼傷

弱光：葉綠體橢球體正面，更好的吸收光能

細(xì)胞質(zhì)不斷流動(dòng)意義：為細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸創(chuàng)造條件，保障生命活動(dòng)正常進(jìn)行

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探究植物細(xì)胞的吸水和失水

[原理]成熟的植物細(xì)胞的原生質(zhì)層相當(dāng)于一層半透膜，細(xì)胞液具有一定的濃度，能夠滲透失水和吸水

[材料]紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞（有大液泡，有顏色）-內(nèi)表皮無顏色

?????可用黑藻等葉綠體較多的材料代替，根據(jù)葉綠體分布情況判斷是否發(fā)生質(zhì)壁分離

[步驟]

(1)制作洋蔥鱗片葉外表皮的臨時(shí)裝片

(2)用低倍顯微鏡觀察洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞中紫色中央液泡的大小，以及原生質(zhì)層的位置

(3)從蓋玻片的一側(cè)滴入蔗糖（0.3g/ml,可使其分離而不死亡)溶液，在蓋玻片的另一側(cè)用吸水紙吸引。這樣重復(fù)幾次，目的是使蓋玻片下面的洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞浸潤在蔗糖溶液中。

(4)用低倍顯微鏡觀察，看細(xì)胞的中央液泡是否逐漸變小，原生質(zhì)層在什么位置，細(xì)胞大小是否變化

(5)在蓋玻片的一側(cè)滴入清水，在蓋玻片的另一側(cè)用吸水紙吸引，這樣重復(fù)幾次，洋蔥鱗片葉表皮又浸潤在清水中

(6)用低倍顯微鏡觀察，看中央液泡是否逐漸變大，原生質(zhì)層位置有沒有變化，細(xì)胞的大小有沒有變化

[結(jié)論]成熟的植物細(xì)胞能與外界溶液發(fā)生滲透作用，外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度時(shí)，細(xì)胞失水發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，外界溶液濃度小于細(xì)胞液濃度時(shí)，細(xì)胞吸水發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原現(xiàn)象

注：原生質(zhì)層,兩膜夾一質(zhì)

滴加方式為引流（吸水紙）

0.5g/ml蔗糖質(zhì)壁分離明顯，但無法復(fù)原

一些物質(zhì)如硝酸鉀aq，甘油等可自動(dòng)復(fù)原

必須用鑷子取下表皮而不能用刀削（太厚）

教材上一直用的是低倍鏡，

實(shí)驗(yàn)本身為前后對(duì)照

觀察根尖分生區(qū)組織細(xì)胞的有絲分裂

[原理]在高等植物體內(nèi)，有絲分裂常見于根尖、芽尖等分生區(qū)細(xì)胞。由于各個(gè)細(xì)胞的分裂是獨(dú)立進(jìn)行的，因此在同一分生組織中可以看到處于不同分裂時(shí)期的細(xì)胞。通過在高倍顯微鏡下觀察各個(gè)時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體的存在狀態(tài)，就可以判斷這些細(xì)胞各處于有絲分裂的哪個(gè)時(shí)期，進(jìn)而認(rèn)識(shí)有絲分裂的完整過程。染色體容易被堿性染料，如甲紫溶液或醋酸洋紅溶液著色。

[目的]制作洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂裝片;觀察植物細(xì)胞有絲分裂的過程，識(shí)別不同時(shí)期，比較細(xì)胞周期不同時(shí)期的時(shí)間長短,繪制植物細(xì)胞有絲分裂簡圖

[材料用具]洋蔥(可用蔥、蒜代替)、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、質(zhì)量濃度為0.01g/mL或0.02g/ml的甲紫溶液或醋酸洋紅液，洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂固定裝片

[步驟]

一，洋蔥根尖的培養(yǎng)

在上實(shí)驗(yàn)課之前的3-4d取洋蔥一個(gè)，放在廣口瓶上。瓶內(nèi)裝滿清水，讓洋蔥的底部接觸到瓶內(nèi)的水面。把這個(gè)裝置放在溫暖的地方培養(yǎng)。待根長約5cm時(shí)，取生長健壯的根尖制成臨時(shí)裝片觀察

二裝片的制作（四步）

1.解離(1)方法上午10時(shí)至下午2時(shí)（分生區(qū)分裂旺盛），剪取洋蔥根尖2-3mm（很難只取分生區(qū)），立即放入盛有15%質(zhì)量分?jǐn)?shù)鹽酸和95%體積分?jǐn)?shù)酒精混合液(1:1)（即解離液）的玻璃皿中，在室溫下解離。

(2)時(shí)間:3-5min

(3)目的:用藥液使組織中的細(xì)胞相互分離開來（根尖本來是圓柱體，好幾層細(xì)胞疊落在一起，難以觀察）

2.漂洗:(1)方法:待根尖軟化后，用鑷子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗

(2)時(shí)間:約10min

(3)目的:洗去藥液，防止解離過度（主要目的）（解離過度會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，無法觀察染色體）；便于染色（酸與堿反應(yīng)會(huì)影響效果）

3.染色:(1)把根尖放進(jìn)盛有質(zhì)量濃度為0.01g/m或0.02/ml的甲紫溶液(或醋酸洋紅液)的玻璃皿中染色

(2)時(shí)間:3-5min

(3)目的:甲紫溶液或醋酸洋紅液能使染色體著色

4.制片:(1)方法:用鑷子將這段根尖取出來，放在載玻片上，加一滴清水（利于根尖的放置，便于排出氣泡），并用鑷子尖把根尖弄碎，蓋上蓋玻片，然后用拇指輕輕地按壓蓋玻片(使細(xì)胞分散開）

(2)目的:使細(xì)胞分散開來，有利于觀察

三，觀察

低倍鏡下找到分生區(qū)細(xì)胞，換上高倍鏡，先找中期（最好找），之后找前后末

注：分生區(qū)細(xì)胞特點(diǎn)：正方形，排列緊密，無大液泡。（題述可為無液泡或有大量小液泡）

解離后細(xì)胞已死，無法觀察到全過程

間期細(xì)胞最多（時(shí)間長）

不能用洋蔥表皮細(xì)胞做（成熟植物細(xì)胞）

各部分全是紫色（染液濃度大或者染色時(shí)間過長）

低溫誘導(dǎo)植物細(xì)胞染色體數(shù)目的變化

[原理]用低溫處理植物分生組織細(xì)胞，能夠抑制紡錘體的形成，導(dǎo)致細(xì)胞不能分裂成兩個(gè)子細(xì)胞，于是植物細(xì)胞染色體數(shù)目發(fā)生變化。

[目的]學(xué)習(xí)低溫誘導(dǎo)植物染色體數(shù)目變化的方法;理解低溫誘導(dǎo)植物細(xì)胞染色體數(shù)目變化的作用機(jī)制。

[材料用具]蒜或洋蔥(均為二倍體，體細(xì)胞中的染色體數(shù)為16)、顯微鏡、卡諾氏液、質(zhì)量濃度為0.01g/mL的甲紫溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15 %的鹽酸溶液，體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液等

[步驟](1)蒜或洋蔥在冰箱冷藏室內(nèi)(4℃)放置一周，取出蒜后將其放在裝滿清水的容器上方，讓蒜的底部接觸水面，于室溫約(25℃)進(jìn)行培養(yǎng)，待蒜長出約1cm的不定根時(shí)，將整個(gè)裝置放入冰箱的冷藏室內(nèi)誘導(dǎo)培養(yǎng)48 -72h（如用洋蔥，36h即可，這一步是真正的誘導(dǎo)染色體加倍）

(2)剪取透導(dǎo)處理的根尖約0.5-1cm,放入卡諾氏液中浸泡0.5-1h,以固定細(xì)胞的形態(tài)（卡諾氏液可以迅速穿過細(xì)胞，固定細(xì)胞形態(tài)并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整，也可使染色效果更好，便于觀察），然后用體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精沖洗2次

(3)制作裝片，包括:解離，漂洗，染色和制片4個(gè)步驟，具體操作方法與觀察植物細(xì)胞的有絲分裂實(shí)驗(yàn)相同(4)先用低倍鏡尋找染色體形態(tài)較好的分裂象。確認(rèn)某個(gè)細(xì)胞發(fā)生染色體數(shù)目變化后，再用高倍鏡觀察

注：觀察有絲分裂也可用卡諾氏液（大學(xué)只要觀察染色體隨便用），但有絲較為明顯，所以沒有用。本實(shí)驗(yàn)涉及到概率較低的變異，用了卡諾氏液效果會(huì)好點(diǎn)。

觀察蝗蟲精母細(xì)胞減數(shù)分裂裝片

[目的]通過觀察蝗蟲精母細(xì)胞減數(shù)分裂裝片，識(shí)別減數(shù)分裂不同時(shí)期染色體的形態(tài)、位置和數(shù)目，加深對(duì)減數(shù)分裂過程的理解

[材料用具]蝗蟲精母細(xì)胞減數(shù)分裂裝片，顯微鏡

[步驟]

(1)在低倍顯微鏡下觀察蝗蟲精母細(xì)胞減數(shù)分裂裝片。識(shí)別初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精細(xì)胞和精細(xì)胞

(2)先在低倍鏡下依次找到減數(shù)分裂1和減數(shù)分裂2不同時(shí)期的細(xì)胞，再在高倍鏡下仔細(xì)觀察染色體的形態(tài)、位置和數(shù)目

(3)根據(jù)觀察結(jié)果，盡可能多地繪制減數(shù)分裂不同時(shí)期的細(xì)胞簡圖

注：該實(shí)驗(yàn)較為簡單（教材的意思是已經(jīng)做好了裝片）

用蝗蟲是因?yàn)槠淙旧w較大，數(shù)目小

蝗蟲為二倍體。雄性2n=23，性染色體為XO，雌性2n=24，性染色體為XX

用雄性生殖器官原因：1，雄性產(chǎn)生精細(xì)胞數(shù)量多于雌性產(chǎn)生的卵細(xì)胞

????????????????????2，大多數(shù)動(dòng)物的卵母細(xì)胞只有在遇到精子后才會(huì)完成減數(shù)分裂2

可用植物觀察，如韭菜4n=32，染色體也比較大，材料易得，花藥數(shù)量大，可用韭菜花粉母細(xì)胞觀察減數(shù)分裂，也能取得較好效果