前兩期帶大家了解了什么是細(xì)胞增殖以及它的方法，這一期我們帶大家了解一下在眾多方法中CCK-8的實驗操作步驟。

操作方法:

1.?在96孔板中配制100?μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時?(在37℃，5% CO2的條件下)。

2.?向培養(yǎng)板加入10?μl不同濃度的待測物質(zhì)。如果測定細(xì)胞活性，則不需要2-3步驟，直接從第四步操作。

3.?將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間?(例如: 6,??12, 24或48小時)。

4.?向每孔加入10?μl CCK-8溶液?(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數(shù))。

5.?將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。

6.?用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。

注意事項:

1）CCK-8試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應(yīng)，如果待檢測體系中有較多還原劑（或抗氧化劑）會造成背景O.D值升高，干擾檢測結(jié)果。如果實驗中有還原劑，請檢查背景的O.D值，即測定、比較空白培養(yǎng)基加入藥物與不加藥物的培養(yǎng)基（含細(xì)胞）在加入CCK- 8試劑后的O.D值，如果空白O.D值明顯偏高，則說明有反應(yīng)，應(yīng)設(shè)法去除或折算干擾因素。

2）如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化，應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測定結(jié)果。

3）為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻，減少CCK-8在移液器上的殘留，建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑，混勻后加樣。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。