測定蛋白混合物中蛋白含量用哪種質(zhì)譜
質(zhì)譜技術有不同的數(shù)據(jù)采集模式:全掃描模式(Full Scan)、單離子監(jiān)測模式(Single Ion Monitor,SIM)以及選擇反應監(jiān)測模式(Selective Reaction Monitor,SRM)或稱多反應監(jiān)測模式(Multi Reaction Monitor,MRM),其工作的原理不同使其適用于不同的分析。
全掃描模式對設定范圍內(nèi)的所有碎片離子進行掃描,獲取其質(zhì)譜信息,更適用于對未知蛋白質(zhì)進行定性分析。對于蛋白質(zhì)定量分析則更傾向于用SIM或SRM/MRM,這三種模式選擇性的采集離子的質(zhì)譜信息,適用于單一或混合蛋白質(zhì)樣品的定量鑒定。SIM更是只采集單個離子信息,因此在這類分析模式下,噪音和干擾被排除得更多,質(zhì)譜分析的靈敏度和信噪比也更高,檢測的結果也更準確。
目前常用的基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)定量技術主要都是采用SRM/MRM掃描模式,主要包括Label Free、SILAC、iTRAQ、TMT、2D-DIGE熒光定量、DIA定量、SWATH定量等。其中Label Free是一種非標記蛋白定量技術,SILAC、iTRAQ、TMT是基于標簽的蛋白定量技術。這些蛋白定量技術都有各自的優(yōu)點和缺陷,在實際應用應根據(jù)實驗目的和需求選擇適宜的檢測方法。
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