葡聚糖凝膠C-25(簡(jiǎn)介、應(yīng)用、使用方法)
葡聚糖凝膠C-25簡(jiǎn)介
葡聚糖凝膠C-25是范德生物自主研發(fā)的一種新型高度交聯(lián)的葡聚糖層析介質(zhì)??,?具有高流速、低反壓、高動(dòng)態(tài)載量及良好的化學(xué)穩(wěn)定性。葡聚糖凝膠C-25方便進(jìn)?行規(guī)模放大,?可以縮短生產(chǎn)時(shí)間,?提高生產(chǎn)效率,?降低大規(guī)模生產(chǎn)成本。
葡聚糖凝膠C-25應(yīng)用
葡聚糖凝膠C-25(CM Sephadex C25)用于離子交換色譜、陽離子交換介質(zhì)、蛋白質(zhì)色譜、分離介質(zhì)和樹脂。
葡聚糖凝膠C-25使用方法
葡聚糖凝膠C-25是顆粒狀,使用時(shí)需要溶脹,其溶脹比取決于所使用的緩沖溶液,不同溶液中的溶脹比不同,而且存在較大差異。溶脹時(shí)不能使用磁力攪拌,否則易導(dǎo)致凝膠破碎。
預(yù)處理
稱取所需量的葡聚糖凝膠C-25,置于?50~100?倍蒸餾水或者上樣平衡液中,溶脹,室溫條件下一般需要溶脹?1~2?天,沸水中一般需要?2?小時(shí)。按每克葡聚糖凝膠C-25加?0.5M?HCl?15ml?的比例,將葡聚糖凝膠C-25浸泡于?0.5M?HCl?中,?攪勻,?靜置?30?分鐘,?裝入布氏漏斗(墊有?2?層濾紙)中抽濾,?并反復(fù)用蒸餾水抽洗至?pH呈中性;然后以?0.5M?NaOH?同上操作過程處理,?最后以?0.5M?HCl?再處理一次。裝柱
裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度?,凝膠裝柱前需要脫氣?。平衡
使用?2~5?倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子,?務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和?pH?同上樣緩沖液的電導(dǎo)和?pH?完全一致。上樣
根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)物濃度和凝膠的載量確定上樣量?。清洗
上樣完畢后,再使用上樣緩沖液平衡柱子,清洗掉不結(jié)合的蛋白和雜質(zhì),直至流出液的電?導(dǎo)和?pH?同上樣緩沖液的電導(dǎo)和?pH?完全一致。?洗脫
使用增大緩沖液中鹽離子濃度或者增加?pH?的連續(xù)洗脫或者梯度洗脫。再生
在柱上先用?1~2M?NaCl?洗去柱上的雜蛋白,再用蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預(yù)處理過程將葡聚糖凝膠C-25再處理一遍即可?。
存儲(chǔ)
葡聚糖凝膠C-25干粉保存于4~25℃?、干燥?、通風(fēng)、清潔處;溶脹后的凝膠保存于4~8℃20%乙醇溶液或?0.01M?NaOH?中?。