腎小管間質(zhì)纖維化動物模型【實驗代做】

【造模機制】結(jié)扎腎靜脈導致腎缺血、腎小管損傷,出現(xiàn)缺血性萎縮和腎小管消亡,腎間質(zhì)增生,出現(xiàn)腎間質(zhì)單核細胞浸潤和纖維化。

【造模方法】選用 Wistar 大鼠,體重 200～250g。用 8.5％水合氯醛(0.1ml/kg)腹腔注射麻醉動物。經(jīng)腹分離左腎靜脈,用 4-0 號手術(shù)縫線結(jié)扎,關(guān)腹,整個手術(shù)過程約 20 分鐘。分別于手術(shù)后第 5 天、第 10 天,第 15 天、第 20 天和第 25 天各處死 5 只大鼠,重點觀察結(jié)扎側(cè)腎臟。殺死前,將大鼠置于代謝籠中,留 24 小時尿,測尿常規(guī);股動脈取血,測血肌酐(SCr)含量。雙側(cè)腎臟組織經(jīng) 10％甲醛液固定,常規(guī)脫水、包埋,4μm 厚石蠟切片。分別進行 HE.PASM.PAS,Masson 染色。

【模型特點】1.病變典型而穩(wěn)定。手術(shù)側(cè)腎臟的病變與人類的腎小管間質(zhì)纖維化的病變極相似。通過動態(tài)觀察,病變早期組織學改變以腎小管上皮變性、萎縮,間質(zhì)淤血,水腫為主,間質(zhì)可見單核細胞浸潤、Ⅲ型膠原增生。中晚期腎小管萎縮和消亡,小動脈管壁增厚,腎間質(zhì)成纖維細胞增多,膠原沉積,Ⅰ型膠原增生。在整個病程中,腎小球可見缺血性改變。

2.方法簡單而周期短操作方法簡單,只需分離腎靜脈并結(jié)扎即可,手術(shù)過程只需 20分鐘;只做單側(cè)腎臟手術(shù),對側(cè)腎臟不受損傷,所以不影響動物的生活;實驗周期短,術(shù)后第10 天即可形成較理想的腎小管間質(zhì)纖維化病變。

【應用范圍】研究腎小管間質(zhì)纖維化腎病的發(fā)病機制和治療方法。中藥治療和藥效研究。

【注意事項】

1.造模一定要選擇結(jié)扎一側(cè)腎靜脈,不能結(jié)扎腎動脈腎動脈結(jié)扎雖然也可以導致腎缺血,但容易出現(xiàn)急性缺血引起腎梗死,腎靜脈結(jié)扎則導致慢性淤血性缺血,從而形成滿意的腎小管間質(zhì)纖維化病變。

2.腎間質(zhì)纖維化程度與細胞凋亡數(shù)量成正相關(guān)提示上皮細胞的過度凋亡可能是腎小管萎縮的重要原因。在觀察腎組織病理變化時增加用上皮細胞特異性標志物 CK-18作一抗行免疫組化染色,應用 Motic 醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)計算陽性與陰性區(qū)域的比值,分析腎小管上皮細胞(RTECs)損傷及凋亡情況。

【模型評估】結(jié)扎腎靜脈造模法是一種方法簡單、成功率高、病變穩(wěn)定,與人類病變極為相似的腎小管間質(zhì)纖維化動物模型。該模型克服了其他模型存在的不足,常見的腎小管間質(zhì)纖維化實驗動物模型建立方法包括藥物誘導、免疫介導、腎次全切除、慶大霉素腎小管損傷模型、腺嘌呤致纖維化模型,單側(cè)輸尿管結(jié)扎,放射損傷,感染等多種,但均有各自的局限性。其中藥物誘導如環(huán)孢素腎炎,多柔比星腎炎等方法,雖然操作簡單且成功率高,但成本高、實驗周期長、間質(zhì)變化較輕。腎次全切除可以造成 TIF 病變,但操作復雜,對動物創(chuàng)傷較大。免疫介導的腎炎模型通過延長致病周期雖然可以得到 TIF 病變,但難以獲得穩(wěn)定的結(jié)果。腺嘌呤致纖維化模型病變穩(wěn)定,但是需要每天按照動物的體重配藥灌胃,操作煩瑣,周期也較長。慶大霉素腎小管損傷模型以腎小管上皮急性壞死再生為主,間質(zhì)纖維化不明顯。單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型通過尿液潴留壓迫損傷腎組織導致間質(zhì)纖維化,時間一般控制在 15 天左右,如果延長時間,腎實質(zhì)受擠壓變得過薄,到第 15 天時,間質(zhì)纖維化病變不明顯。

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