百螢小課堂之生物素和鏈霉親和素
百螢生物素-鏈霉親和素復(fù)合物是用于綴合生物分子(例如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸)以及合成分子(例如熒光標(biāo)記)的最流行標(biāo)簽系統(tǒng)之一。它已作為許多純化系統(tǒng)的核心部分,在樣品制備領(lǐng)域取得了巨大成功,并且在許多儀器檢測(cè)系統(tǒng)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,例如顯微鏡和流式細(xì)胞儀。
百螢 生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)物
? ? ? ? 生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)物被廣泛采用主要有兩個(gè)因素:第一個(gè)是生物素和鏈霉親和素分子本身的相對(duì)較小,它可以與生物活性大分子(例如抗體)相結(jié)合,而不會(huì)對(duì)其功能(即抗體的結(jié)合位點(diǎn))產(chǎn)生影響;第二個(gè)是生物素和鏈霉親和素彼此結(jié)合的特異性,可實(shí)現(xiàn)強(qiáng)大的流線型生物測(cè)定應(yīng)用。鏈霉親和素四聚體對(duì)生物素具有極高的結(jié)合親和力,解離常數(shù)(KD)約為10-14摩爾-升。這種緊密而特異性的結(jié)合是迅速的,并且能夠承受PH、溫度、有機(jī)溶劑和變性劑的極端作用。
百螢 生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)物的優(yōu)點(diǎn)
1.生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)物的主要優(yōu)勢(shì)在于其提高檢測(cè)靈敏度的能力:由于鏈霉親和素的四聚體構(gòu)象。一種鏈霉親和素蛋白具有以高親和力和選擇性結(jié)合四個(gè)生物素分子的能力。這種多樣性使微弱信號(hào)得以放大,并通過(guò)簡(jiǎn)單的工作流程提高了對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織中中等和低豐度靶標(biāo)的檢測(cè)靈敏性。
2.生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)物的多功能性:由于鏈霉親和素可以與多種報(bào)道分子標(biāo)記物偶聯(lián),因此幾乎可以將其結(jié)合到幾乎所有的免疫測(cè)定中。
百螢 生物素-鏈霉親和素偶聯(lián)物的應(yīng)用領(lǐng)域:
1.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)
2.免疫組織化學(xué)(IHC)
3.免疫熒光顯微技術(shù)
4.親和純化
5.熒光激活細(xì)胞分選(FACS)
6.流式細(xì)胞儀
百螢提供了生物素化的二抗、蛋白質(zhì)、核苷酸和其他小分子,可用于基于鏈霉親和素的擴(kuò)增技術(shù)。對(duì)于無(wú)法使用生物素化探針的測(cè)定,我們提供了許多生物素化試劑和試劑盒,使研究人員能夠化學(xué)標(biāo)記蛋白質(zhì)、核酸以制備生物素化試劑。