一、實驗簡介

熒光定量PCR（qPCR）是一種利用熒光探針實時監(jiān)測PCR反應(yīng)進程的技術(shù)。在qPCR實驗中，PCR反應(yīng)結(jié)束后，熒光探針會與PCR擴增產(chǎn)物結(jié)合，熒光信號隨著擴增產(chǎn)物的累積而增加。熒光信號的強度與擴增產(chǎn)物數(shù)量成正比，通過檢測熒光信號的強度，可以快速、準確地定量和鑒定PCR反應(yīng)產(chǎn)物。

在廣州如期生物技術(shù)有限公司檢測牛、羊、豬源性成分的實驗中，采用qPCR技術(shù)，根據(jù)設(shè)計的特異性引物和探針，擴增目標DNA序列，并利用熒光探針實時檢測PCR反應(yīng)的進行過程。如果明膠中存在牛、羊、豬源性成分，引物和探針會特異性地擴增目標DNA序列，產(chǎn)生熒光信號。如果不含有這些動物源性成分，則PCR反應(yīng)不會擴增目標DNA序列，熒光信號的強度極低或不發(fā)生。通過檢測熒光信號的強度和產(chǎn)生的周期數(shù)，可以判斷是否含有牛、羊、豬源性成分。

二、實驗流程

1．提取樣品DNA，并對其進行純化和定量。

2．進行實時熒光PCR擴增，引物和探針會與目標DNA序列結(jié)合并擴增。反應(yīng)中還需要添加熒光探針，用于檢測PCR反應(yīng)產(chǎn)物的數(shù)量。熒光探針在PCR反應(yīng)中結(jié)合到DNA序列上時會發(fā)光，因此可以通過測量熒光信號來定量PCR產(chǎn)物的數(shù)量。

3．進行熒光定量PCR反應(yīng)，并測量熒光信號。

4．根據(jù)測量到的熒光信號，可以確定是否存在特定的牛、羊、豬DNA序列。如果存在，則說明明膠中含有對應(yīng)的動物源性成分。

需要注意的是，熒光定量PCR法只能用于定性檢測，不能確定動物源性成分的含量。如果需要進行含量測定，可能需要使用其他技術(shù)。此外，該方法需要引物和探針的特異性很高，否則可能會導致假陽性或假陰性結(jié)果。因此，在實驗設(shè)計中需要仔細考慮引物和探針的選擇。

三、技術(shù)特點

1、高靈敏度：熒光定量PCR法可以在高度稀釋的樣品中檢測到特定的牛、羊、豬DNA，因此可以檢測到非常低濃度的牛、羊、豬源性成分。

2、高特異性：熒光定量PCR法基于特定的引物和探針設(shè)計，可以選擇性地擴增牛、羊、豬特異性的DNA序列，因此不會被其他種類的DNA序列干擾。

3、快速、簡便：熒光定量PCR法可以在短時間內(nèi)完成擴增反應(yīng)，不需要繁瑣的操作流程，且可自動化進行。

4、可靠性：熒光定量PCR法具有高度可重復性和穩(wěn)定性，可以準確、快速、可靠地檢測樣品中牛、羊、豬源性成分的存在和濃度。

5、大批量檢測：熒光定量PCR法可以通過PCR擴增和實時熒光定量技術(shù)快速地檢測多個樣品，適用于大批量檢測。

PCR電泳

廣州如期生物技術(shù)有限公司http://bioruqi.com/