實(shí)驗(yàn)原理

液相質(zhì)譜法基于特征多肽鑒定的膠原蛋白多肽檢測，是一種通過鑒定膠原蛋白特異的多肽片段來檢測膠原蛋白的方法。該方法基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS），通過檢測肽段的質(zhì)譜信號來定性和定量樣品中的膠原蛋白多肽。

二、實(shí)驗(yàn)介紹

將膠原蛋白試樣溶解，加熱變性后進(jìn)行胰蛋白酶酶解，釋放特征多肽；再用液相色譜質(zhì)譜法測定。 以不同類型膠原蛋白特征多肽的保留時(shí)間和二級子離子碎片的質(zhì)荷比進(jìn)行定性和確證，用外標(biāo)法或內(nèi) 標(biāo)法進(jìn)行定量。 用合成的不同類型膠原蛋白特征多肽作為標(biāo)準(zhǔn)品，實(shí)現(xiàn)外標(biāo)法定量檢測；用合成的相同特征多肽序 列的同位素標(biāo)記特征多肽與非同位素標(biāo)記特征多肽按一定比例混合，實(shí)現(xiàn)內(nèi)標(biāo)法定量檢測。同位素內(nèi) 標(biāo)法有助于改善基質(zhì)效應(yīng)對測定準(zhǔn)確性的干擾。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、待測樣品制備：樣品的變性溶解和酶解；

2、液相色譜-質(zhì)譜操作條件是典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器的特點(diǎn)，對操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整；

3、數(shù)據(jù)分析：根據(jù)質(zhì)譜圖譜，使用肽段序列信息和數(shù)據(jù)庫匹配算法鑒定膠原蛋白。通過計(jì)算肽段的峰面積或峰高，來定量樣品中的膠原蛋白。

膠原蛋白質(zhì)譜定量檢測方法的優(yōu)點(diǎn)是具有高靈敏度和高特異性，可以測量不同來源的膠原蛋白，并能夠檢測出低濃度的膠原蛋白。此外，該方法不需要膠原蛋白的特異性抗體或酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）等試劑，可以避免交叉反應(yīng)和誤差。

四、技術(shù)特點(diǎn)

1、高靈敏度：該方法可以檢測極低濃度的膠原蛋白，甚至可以檢測到只有幾個(gè)分子的膠原蛋白，具有非常高的靈敏度。

2、高特異性：該方法基于特征多肽鑒定，可以精確地區(qū)分不同來源的膠原蛋白，具有非常高的特異性。

3、高準(zhǔn)確性：該方法使用液相質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行多肽分析，可以準(zhǔn)確地確定膠原蛋白的多肽組成，從而實(shí)現(xiàn)高準(zhǔn)確性的檢測結(jié)果。

4、高通量：該方法可以同時(shí)檢測多個(gè)樣品，具有高通量的優(yōu)勢，可以快速地對大量樣品進(jìn)行檢測。

5、無需特殊處理：該方法不需要對樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理，比如酶切、保護(hù)基的去除等，簡化了樣品制備的步驟，提高了檢測的效率。

五、應(yīng)用范圍

用于分析和鑒定天然膠原蛋白和人工合成膠原蛋白中的多肽組成。

六、實(shí)驗(yàn)檢測項(xiàng)目

廣州如期生物技術(shù)有限公司提供的液相質(zhì)譜法基于特征多肽鑒定的膠原蛋白多肽檢測法針對不同動(dòng)物來源或不同型別的膠原蛋白，也可自行篩選合適的特征多肽經(jīng)驗(yàn)證后進(jìn)行定量檢測。

常見樣品類型

序號類型

1牛Ⅰ型

2牛Ⅱ型

3豬Ⅰ型

七、結(jié)果分析

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