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? ? ? ?近年來，用于重組蛋白藥物生產(chǎn)的主要細(xì)胞為哺乳動物細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兙哂蓄愃迫祟惣?xì)胞的糖基化修飾方式，HEK293 衍生的細(xì)胞系通常用于瞬時蛋白質(zhì)生產(chǎn)，已成為一種廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)重組蛋白的哺乳動物異源表達(dá)系統(tǒng)。

一、什么是HEK93

? ? ? ?HEK293細(xì)胞，又叫人胚胎腎細(xì)胞293，是一個衍生自人胚胎腎細(xì)胞的細(xì)胞系，具有轉(zhuǎn)染效率高，易于培養(yǎng)等特點(diǎn)。因此成為了廣大研究者研究基因功能的一個強(qiáng)大工具。

二、HEK293細(xì)胞系概覽

（注：以下細(xì)胞介紹中，HEK293細(xì)胞簡稱為293細(xì)胞）

293T細(xì)胞：293細(xì)胞中轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株，即為293T細(xì)胞系。這使得包含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細(xì)胞系中顯著擴(kuò)增，從而促進(jìn)表達(dá)載體的擴(kuò)增，促進(jìn)蛋白的表達(dá)。293T細(xì)胞除了可用于各類基因表達(dá)及蛋白生產(chǎn)，還可用于高滴度逆轉(zhuǎn)錄病毒及其他病毒生產(chǎn)，如腺病毒及其他哺乳動物病毒。

293T/17細(xì)胞：293T細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染入pBND 和 pZAP 質(zhì)粒，獲得的具有G418耐受的細(xì)胞系即為293T/17細(xì)胞系。該細(xì)胞系在保有293T細(xì)胞的優(yōu)良性能之外，還具有高轉(zhuǎn)染性的特點(diǎn)。

293H細(xì)胞：293H細(xì)胞則指的是將293細(xì)胞馴化后得到的能夠在無血清培養(yǎng)體系下快速生長、具有高轉(zhuǎn)染效率及高效蛋白表達(dá)性能的細(xì)胞系。另外，該細(xì)胞系貼附力好，而被用于噬菌斑檢測等應(yīng)用。

293E細(xì)胞：293E細(xì)胞指的是在293-H細(xì)胞中插入EBNA-1基因的細(xì)胞系，該基因能夠穩(wěn)定表達(dá)EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV復(fù)制起點(diǎn)（oriP）的重組表達(dá)質(zhì)粒，能夠在H293E細(xì)胞中復(fù)制，并實(shí)現(xiàn)蛋白的高效表達(dá)。

293F細(xì)胞：293F細(xì)胞是一類能夠在無血清中高表達(dá)蛋白的野生型293細(xì)胞系。293FT細(xì)胞是在293F細(xì)胞系中插入pCMV- SPORT6-TAg.Neo質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，能夠快速增殖，易轉(zhuǎn)染，其能夠用于慢病毒的生產(chǎn)。

293S細(xì)胞：293S細(xì)胞則指的被馴化成能夠懸浮培養(yǎng)且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件的293細(xì)胞系。

293SGGD細(xì)胞：293SGGD細(xì)胞系則指的是在293SG轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-zeo-STendoT質(zhì)粒的細(xì)胞系，其主要用于糖基化工程研究中。

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HEK293細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢

1)?轉(zhuǎn)染效率高；

2)?2) 可懸浮培養(yǎng)用于大規(guī)模表達(dá)；

3) 表達(dá)蛋白結(jié)構(gòu)最接近其在人體內(nèi)構(gòu)象；

4) HEK293細(xì)胞在培養(yǎng)體系中能夠快速增長，高密度培養(yǎng)。

5) HEK293細(xì)胞與神經(jīng)元細(xì)胞一樣，對外界微環(huán)境較為敏感，利用這一特點(diǎn)，可用于藥物發(fā)現(xiàn)及細(xì)胞毒性測試。

? ? ? ?在HKE293細(xì)胞系培養(yǎng)的整個過程中，都需要對細(xì)胞進(jìn)行濃度和活率檢測，牛頓光學(xué)CytoCubeAuto全自動便攜高通量細(xì)胞計數(shù)儀是一款基于圖像法檢測的細(xì)胞計數(shù)儀，具有優(yōu)秀的光路系統(tǒng)和圖像識別系統(tǒng)，能夠有效的區(qū)分細(xì)胞碎片與雜質(zhì)的干擾，得到非常穩(wěn)定可靠的結(jié)果。

參考文獻(xiàn)：Lin Y C, Boone M, Meuris L, et al. Genome dynamics of the human embryonic kidney 293 lineage in response to cell biology manipulations[J]. Nature communications, 2014, 5: 4767.

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