無論是9:1，還是6:3:1，這熟悉的凍存液配方中，一直未變的是DMSO。今天跟著小海星我們一起來了解一下凍存液中DMSO的作用吧。

DMSO屬于一種可滲透到細(xì)胞內(nèi)的冷凍保護(hù)劑。在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前，DMSO滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷，同時，細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細(xì)胞過分脫水皺縮。

值得注意的是，DMSO在常溫下對細(xì)胞的毒性作用較大，而在4°C時，其毒性作用大大減弱，且能以較快的速度滲透到細(xì)胞內(nèi)。所以，凍存時需要徹底預(yù)冷凍存液，放置在4°C需要至少30分鐘的時間。最簡便的方法，當(dāng)然是將凍存液一直放在4°C冰箱中，隨用隨取，用完放回冰箱。

滴加凍存液凍存細(xì)胞時，滴加速度要緩慢，如果滴加速度過快，則在細(xì)胞外產(chǎn)生很高的滲透壓，造成細(xì)胞膜的損傷，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，故要緩慢滴加，讓凍存液有足夠的時間緩慢滲透到細(xì)胞內(nèi)，達(dá)到細(xì)胞內(nèi)外的平衡。

DMSO在低溫下能保護(hù)細(xì)胞，但在常溫下卻對細(xì)胞有害，研究結(jié)果表明，培養(yǎng)液中DMSO濃度為10 %時，細(xì)胞生長抑制率近100 %；1%濃度時抑制率為35%，即使是0.04 %的濃度，DMSO對細(xì)胞的生長也有不利的影響[1]。正是因為如此，細(xì)胞復(fù)蘇后需要離心去除DMSO。

問題來了，使用DMSO配制凍存液，怎么保證無菌呢？其實，大可不必?fù)?dān)心DMSO的無菌問題。研究表明，2%的DMSO，就能抑制白色念珠菌和酵母菌等多種細(xì)菌的生長。[2]基于DMSO如此優(yōu)秀的抑菌性，高純度的DMSO視乎無菌，可以直接配制使用，不必大費周章的高壓滅菌或過濾除菌。如果非要過濾，需要選擇0.22um的尼龍膜或者PTFE膜。最后，需要注意的是配制和使用時含DMSO的凍存液時需要做好個人防護(hù)，戴好手套。雖然DMSO對于人體來說，低毒甚至近乎無毒，由于它極強(qiáng)的皮膚滲透性，很多藥物選擇用DMSO溶解加以治療疾病，但DMSO易引起皮膚過敏，因此不想皮膚瘙癢、燒灼，散發(fā)出大蒜般氣味的話還是認(rèn)真做好防護(hù)工作吧。

問題又來了，該選擇什么樣的配方呢？9:1，還是6:3:1？哪種效果更好？

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[1]?劉耳, 王金兵. 細(xì)胞凍存保護(hù)劑二甲基亞砜的細(xì)胞毒作用[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報, 1994(4):50-52[2]?Zaragoza O,Mesa-Arango AC, Gómez-López A, et al. Process analysis of variables for standardization of antifungal susceptibility testing of nonfermentative yeasts [J]. Antimicrob Agents Chemother,2011,55(4):1563-1570.

作者：海星生物

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