主要組分：

活性超級生物素???? 2mg/4mg/6mg

超 濾 管??????? 1支

標記緩沖液?????? 30mL/60mL/90mL

標記物保存液????? 2mL/4ml/10ml

助溶劑（DMSO）???? 1mL/1.5mL/2mL

選購之前客戶需要根據(jù)待標記物的分子量大小和標記量選擇最適宜的型號

????產(chǎn)品編號

最大標記體積

待標記物最小分子量

可標記抗體量

ARL0020S-3K-0.5mL

0.5mL

3kDa

0.2-10mg

ARL0020S-3K-4.0mL

4.0mL

3kDa

1.0-80mg

ARL0020S-3K-15mL

15mL

3kDa

5-300mg

ARL0020S-10K-0.5mL

0.5mL

10kDa

0.2-10mg

ARL0020S-10K-4.0mL

4.0mL

10kDa

1.0-80mg

ARL0020S-10K-15mL

15mL

10kDa

5-300mg

ARL0020S-30K-0.5mL

0.5mL

30kDa

0.2-10mg

ARL0020S-30K-4.0mL

4.0mL

30kDa

1.0-80mg

ARL0020S-30K-15mL

15mL

30kDa

5-300mg

ARL0020S-50K-0.5mL

0.5mL

50kDa

0.2-10mg

ARL0020S-50K-4.0mL

4.0mL

50kDa

1.0-80mg

ARL0020S-50K-15mL

15mL

50kDa

5-300mg

ARL0020S-100K-0.5mL

0.5mL

100kDa

0.2-10mg

ARL0020S-100K-4.0mL

4.0mL

100kDa

1.0-80mg

ARL0020S-100K-15mL

15mL

100kDa

5-300mg

產(chǎn)品介紹：

本生物素標記試劑盒提供了超級生物素快速標記所需全部試劑，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗體/多肽或者其他大分子的標記。本生物素通過其反應原理如下:

產(chǎn)品特點：

l?延長了生物素的連接臂,更少地減少空間位阻,也可以適合于細胞的表面標記;

l???使用方法簡單，無需額外準備試劑；

l???節(jié)約時間，整個過程僅需 90min；

l???通過離心脫鹽和去除游離的生物素,無需透析或者凝膠過濾；

?

超級生物素標記使用量的計算：每個反應中生物素試劑的使用量取決于待標記蛋白質(zhì)的量和濃度。例如,通過我們實驗數(shù)據(jù)分析表明,標記2mg/ml 的抗體（IgG ，150KD），使用生物素和抗體的分子比為 20:1 能達到最佳效果;其他蛋白的標記可以根據(jù)實際情況,參照此比例類推。

計算公式如下：

其中：V(μL)為生物素的體積；

??????V1(mL)為待標記物（蛋白/抗體/其他含有伯胺-NH2的大分子）；

????? C1(mg/mL)為待標記物的濃度；

????? R?為生物素與待標記物的分子比例；???????????

????? M為待標記物的分子量（道爾頓，Dalton，Da）

????? C(mM)為生物素的濃度

?

計算示例：我們將生物素配置成10mM的濃度，用來標記1mL 的2mg/ml 的抗體（IgG ，150KD）,準備加入的生物素與抗體的比例為20:1，那么帶入公式計算

實驗前準備：

1.仔細閱讀使用說明書。

2.按照生物素標記使用量的計算的公式計算所需要的生物素的量。

3.提前 20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫。

4.用助溶劑DMSO將活性超級生物素配制成10mM(2mg超級生物素加DMSO 440ul)?

?特別提示：

A.???????溶解的活性生物素最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內(nèi)，一月內(nèi)可以使用，但是標記效率會降低；

B.???????生物素助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

?

操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進行標記）

1.取1mg 待標記抗體于超濾管中，并加入不超過超濾管最大體積的標記緩沖液，12,000g 離心 10min；可以重復此步驟多次；最后一次超濾完成，可以加入適量標記緩沖液調(diào)整抗體的濃度到2mg/mL左右；

請注意：

A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實例超濾管的最大體積為 0.5mL；

B.如果待標記抗體濃度低時，可先超濾離心濃縮；

C.如果待標記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標記緩沖液反復超濾確保其去除干凈）

?

2. 加入13.3μL溶解的活性超級生物素至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻。放入 37℃恒溫箱中避光溫育 30min。

3. 12,000 x g 離心 10min。

4. 加入適量標記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000g 離心 10min， 重復此步驟多次。

5. 收集超濾管中的溶液（即生物素標記的抗體），加入等體積保存液，-20℃保存。

注意事項：

1.本試劑盒適用于所有含有伯氨基（NH2-）的大分子物質(zhì)的標記，（蛋白，抗體，以及其他含有伯氨基（NH2-）的化合物分子），具體標記比例根據(jù)待標記物中氨基的數(shù)量確定；

2.本試劑盒中的生物素助溶劑為DMSO ，使用完畢后要密封干燥保存；

3.本試劑盒配備了標記物保存液，實驗人員也可以根據(jù)被標記物的特點不同，選擇更適合的保存液。

4.本試劑盒未開封前的有效期為18個月，請在有效期內(nèi)使用。

5.本系列試劑盒提供的為超濾管分為不同的截留分子量和不同的最大容積，客戶需要根據(jù)自己要標記的物質(zhì)的分子量大小和標記量選擇適合的型號。

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*本試劑僅供實驗室研究使用

生物素快速標記試劑盒常見問題和解答：

1.生物素與抗體的比例怎么計算？比如說標記1mL的2mg/mL的抗體（100kDa），大概添加比例是多少？

?答：一般抗體：生物素=1：20??? 摩爾比，抗體濃度高比例可以做到1：15，如果濃度低，建議1：20以上，最高可以做到1：50，前提是你必須做到定量是準確的。

?

2. 在標記過程中離心轉(zhuǎn)速12000g不會對超濾管有影響嗎？且超濾轉(zhuǎn)速高時間長抗體會不會流失掉呢？標記的第1和4步說要反復離心的意思可以理解為置換緩沖液，相當于透析嗎？

?答：標記的過程中超濾管的離心轉(zhuǎn)速是12000rpm,不是12000g，當然每個離心機換算會有不同，不會對超濾管有影響，抗體的分子不會穿過超濾管的濾膜流失掉的。多次離心的目的就是要把原來溶液中的緩沖液置換成目的緩沖液，或者是通過反復超濾稀釋，去除掉游離的小分子，和透析的作用是一樣的。對于超濾的效果，主要看每次超濾前體積和超濾后剩余體積，以及超濾次數(shù)。

案例文獻：

Screening of the candidate inhibitory peptides of subtilisin by in vitro RNA display technique

H Wang, P Song, X Li, Y Wang, S Gui, Y Liu…?- International Journal of?…, 2020 - Elsevier

…

Biotin modification of the purified subtilisin Savinase (Activity: 4.4 × 105 U/mL, from Tianjin Nuoao Technology Co., Ltd., China), was performed by using the?biotin labeling kit (Friendbio Science & Technology Co., Ltd., China).?A 10 kDa ultrafiltration tube (Millipore, USA) containing 500 μL of subtilisin solution was centrifuged and concentrated. Consequently, 200 μL of labeling buffer and 13.3 μL of super biotin solution were added and mixed, followed by an incubation of the mixture at 37 °C in the dark for 30 min. The mixture was centrifuged and concentrated at 12000 r/min for 10 min. The filtrate was discarded, and 300 μL of labeling buffer was added to the retention solution. The mixture was vortexed, followed by centrifugation and concentration. The retention solution was collected for the magnetic bead fixation after repeating the procedure twice. 100 μL of streptavidin (1 mg) magnetic beads (Wuxi BioMeg Biotechnology Co., Ltd., China) were taken in a magnetic bead tube and washed with PBS pH 7.4 thrice [41,42]. Subsequently, 100 μL PBS and 100 μL of biotin-modified subtilisin solution were added, and the mixture was shaken at room temperature for 30 min to keep the magnetic beads in suspension for immobilization. The subtilisin-immobilized magnetic beads were washed with PBS thrice and resuspended in 80 μL PBS.