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? 說到預(yù)后模型，大家應(yīng)該都不陌生。最近幾年，預(yù)后模型相關(guān)SCI更是如雨后春筍般涌現(xiàn)出來。2021年初，為了趕上這波熱潮，小薇也是快馬加鞭撰寫了幾篇預(yù)后模型文章，抓緊的投了稿，坐等接收函。

? ? 這一等，就是一年……?然而，等來的幾乎都是拒稿，大部分審稿人都明確指出缺乏實驗驗證。由此看來，純生信分析的預(yù)后模型越來越難發(fā)表了，但是手上已有的分析數(shù)據(jù)真的不忍心放棄，想要發(fā)表文章，必須要盡快的安排補充實驗。那么，該如何設(shè)計和補充后續(xù)的驗證實驗，是首要考慮的問題。今天，小薇就結(jié)合幾篇文獻，給大家提供一點思路和靈感。

&?簡單的細胞驗證

參考文獻?[PMID: 36357874；IF=4.638（2區(qū)）]

選擇模型中感興趣的一兩個基因（可以選擇與預(yù)后最相關(guān)的一些基因），研究敲除基因?qū)毎飳W(xué)功能的影響，例如使用Transwell試驗、細胞劃痕實驗，觀察基因改變對細胞增殖和遷移能力的影響。

&?細胞加動物實驗驗證

參考文獻?[PMID: 35792657；IF=6.518（2區(qū)）]

收集臨床組織以及細胞樣本，qRT-PCR和免疫組化驗證基因的表達水平。選擇其中重點的基因（本篇文章選擇以往報道較少的基因），研究它的生物功能。首先，觀察敲除/過表達基因?qū)毎鲋?/span>，克隆和遷移的影響；其次，將穩(wěn)定敲除/過表達基因的細胞注射裸鼠（如果基因在腫瘤組織中高表達，小鼠模型一般會選擇基因敲除細胞系），構(gòu)建皮下移植瘤模型。收集腫瘤樣本，計算腫瘤體積，并且通過Ki-67染色觀察增殖細胞。

&?臨床樣本驗證

參考文獻?[PMID: 35468826；IF=8.440（2區(qū)）]

先大致介紹文章內(nèi)容：篩選了14個基因構(gòu)建模型，為了從這些基因里再挑選出關(guān)鍵基因，做了WGCNA分析，篩出兩個hub基因：PLTP和PHKA1。隨后，分析這些基因與免疫浸潤細胞的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)這兩個基因與M2巨噬細胞呈正相關(guān)。因此，基于這兩個基因做驗證實驗。

使用的材料是組織芯片（tissue microarray）[作者用的是自己醫(yī)院做的組織芯片，也可以進行購買]。具體內(nèi)容：

1）多色熒光免疫組化（mIHC）檢測基因在彌漫大B細胞淋巴瘤和對照樣本中的表達水平。

2）X-tile分析基因表達的臨界值，將樣本分為高表達組和低表達組。并且分析基因表達與患者預(yù)后的相關(guān)性。

3）建立M2巨噬細胞等免疫細胞標(biāo)志物的染色板，利用mIHC對樣本中M2巨噬細胞進行表征。

參考文獻 [PMID: 34975331；IF=10.750（2區(qū)）]

收集臨床組織樣本，使用qRT-PCR和免疫組化檢測模型中基因在正常和癌癥組織中的表達水平。另外，收集患者的隨訪數(shù)據(jù)并進行分析，探究基因表達與患者預(yù)后之間的關(guān)系。并且，計算患者的風(fēng)險評分，將樣本分為高危組和低危組，進一步分析不同風(fēng)險組之間的預(yù)后差異。

? ? 今天就先分享到這里啦，總結(jié)一下大致可以分為細胞實驗、動物實驗、臨床樣本三類。其中，臨床樣本的驗證發(fā)的分值會高一些，如果自己沒有樣本，還可以購買組織芯片，缺點是有些芯片會缺少一些患者的臨床隨訪信息。另外，如果模型中涉及的基因較多的話，可以挑選一兩個基因做重點的驗證，但是需要說清楚選擇這些研究基因的原因。看完以后，大家有沒有受到啟發(fā)呀，要是審稿人再說添加實驗，知道怎么做了吧。如果還是覺得不太明白的話，歡迎隨時聯(lián)系小薇一起解決哦！

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