細(xì)胞膜熒光探針DiA-DiA/DiA/BTA-2/BSB/QDs-SA和Cy3熒光標(biāo)記細(xì)胞模制備
瑞禧生物小編今日為大家分享的科研知識(shí)是細(xì)胞膜熒光探針DiA-DiA/DiA/BTA-2/BSB/QDs-SA和Cy3熒光標(biāo)記細(xì)胞模的制備,一起來看!

QDs-SA和Cy3熒光標(biāo)記細(xì)胞模研究制備:
將pcDNA3.1/APP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞建立穩(wěn)定表達(dá)株,Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞APP蛋白的表達(dá),細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Aβ蛋白生成.建立AD轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型,分別應(yīng)用QDs-SA和Cy3細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)靶向標(biāo)記轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型的Aβ蛋白,激光共聚焦顯微鏡下對(duì)熒光強(qiáng)度和抗光漂白特性進(jìn)行檢測(cè).
Western blot法在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染pcDNA3.1/APP質(zhì)粒的細(xì)胞中檢測(cè)到APP目的蛋白譜帶,而未轉(zhuǎn)染的空載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞未見APP蛋白表達(dá).共聚焦熒光顯微鏡下觀察到:①APP基因轉(zhuǎn)染后能夠生成大量Aβ蛋白;②QDs-SA特異標(biāo)記的Aβ蛋白主要分布在細(xì)胞膜和胞質(zhì),顯現(xiàn)出均勻分布的高密度橙紅色強(qiáng)熒光;③Cy3特異標(biāo)記Aβ蛋白熒光強(qiáng)度較QDs-SA標(biāo)記弱,且細(xì)胞膜染色不均勻,部分細(xì)胞膜區(qū)域有染料少量團(tuán)聚;④QDs-SA相較于傳統(tǒng)Cy3熒光染料的平均熒光強(qiáng)度值更大(P0.05),488 nm激發(fā)光連續(xù)激發(fā)12 min,QDs-SA熒光標(biāo)記的Aβ蛋白仍發(fā)射較強(qiáng)的橙紅色熒光,熒光強(qiáng)度下降了29.25%,而傳統(tǒng)熒光染料Cy3熒光強(qiáng)度下降幅度達(dá)76.82%.
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RXYWX.2022.8.19