Fura red AM；鈣離子熒光探針
Fura Red 是一種可見光可激發(fā)的 fura-2 類似物，當與單激發(fā)、綠色熒光鈣指示劑一起使用時，它提供了通過顯微光度法、成像或流式細胞術(shù)對單細胞中鈣離子進行比例測量的獨特可能性。 Fura Red AM 是 Fura Red 的細胞滲透版本，用于無創(chuàng)細胞內(nèi)加載。 Fura Red AM 可以與 Fluo-3 AM、Fluo-8 AM 或 Cal-520 AM 同時加載到細胞中。 結(jié)合兩種鈣染料的一個優(yōu)點是可以使用具有更長激發(fā)波長的染料。 這通常比使用用紫外線或近紫外線激發(fā)的比例染料（例如 Fura-2）對細胞造成的傷害更小，因為可見波長的光的光毒性較小。
圖1.Fura red AM化學結(jié)構(gòu)
以下是我們推薦的將 AM 酯加載到活細胞中的protocol。 本protocol僅提供指導原則，應根據(jù)您的具體需要進行修改。
在生長培養(yǎng)基中過夜制備細胞。
第二天，將 1X Fura Red AM 工作溶液添加到您的細胞板中。
注意：如果您的化合物干擾血清，請在染料加載前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養(yǎng)基。
在 37 °C 的細胞培養(yǎng)箱中孵育載有染料的板 30 至 60 分鐘。
注意：孵育染料超過 1 小時可以提高某些細胞系的信號強度。
用 HHBS 或您選擇的緩沖液（包含陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑，如 1 mM 丙磺舒，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。
根據(jù)需要添加興奮劑，同時使用熒光板讀取器監(jiān)測熒光強度，其中包含可編程液體處理系統(tǒng)，例如 FlexStation，在 Ex/Em1 = 435/630 nm 截止 610 nm 和 Ex/Em2 = 470/650 nm 截止 630 納米。
Fura red AM光譜特性
激發(fā)（納米）：435
發(fā)射（納米）：639
圖2.Fura red AM光譜圖
