293A 人胚腎細(xì)胞 培養(yǎng)傳代信息介紹
細(xì)胞介紹
293A 細(xì)胞系是 293 細(xì)胞系的亞克隆，其形態(tài)相對(duì)平坦?？捎行Мa(chǎn)生、擴(kuò)增和滴定復(fù)制功能不全的腺病毒。細(xì)胞系包含穩(wěn)定整合的 E1 基因拷貝，其提供生成重組腺病毒所需的 E1 蛋白（E1a 和 E1b）。細(xì)胞的平坦形態(tài)使得滴定程序更簡單。該細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔；換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基；收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán)，為正?，F(xiàn)象。
基本信息
細(xì)胞別稱：HEK293-A;HEK-293A;HEK293A;
HEK 293A;QBI-HEK 293A;QBI-293A
細(xì)胞來源：胚胎腎臟
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長特性：貼壁生長
安全等級(jí)：BSL1
包裝規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
倍增時(shí)間：~40-60 hours
傳代比例：1:3~1:4
培養(yǎng)保存
培養(yǎng)體系：DMEM（TM055）+10%FBS（TS500）
培養(yǎng)條件：氣相: 空氣, 95%; CO2, 5%; 溫度: 37℃
凍存條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+40%FBS（TS500），液氮保存
傳代步驟
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次；
加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化；
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻；
收到細(xì)胞后首次傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行。
凍存步驟
細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；
4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細(xì)胞密度不低于1x10(6)/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)；
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞用途
僅供科研使用。
