高考生物試題技能分析（2021全國乙卷非選擇題選考題選修3部分）
這道題相比預(yù)期的難度還是低了很多的，只要記住了基因工程中的基本概念，拿滿分是不難的。
基因工程中最主要的兩種工具酶包括限制性核算內(nèi)切酶（也叫限制酶）和DNA連接酶。DNA連接酶又可以分為兩類，分別是E·coli DNA連接酶和 DNA連接酶。其中E·coli DNA只能鏈接粘性末端（即限制酶從識別序列中軸線兩側(cè)切割留下的末端），也就是EcoR I和Pst I兩種限制酶切下的DNA片段末端。而
DNA連接酶則不論是粘性末端還是平末端（即限制酶從識別序列中軸線切割留下的末端）都能連接了，因此EcoR I、Sma I、Pst I和EcoR V切割留下的片段都可以用
DNA連接酶連接。
當(dāng)然是DNA分子中脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵啦。
這道題考得就比較有水平了，如果不能理解運(yùn)載體上各個(gè)部分的功能的話，這道題是難拿滿分了。
運(yùn)載體需要滿足的條件有以下三個(gè)，而每一個(gè)條件都是與其需要滿足的功能相對應(yīng)的：
具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)。是為了目的基因的插入。
具有復(fù)制原點(diǎn)。是為了目的基因能夠隨著運(yùn)載體自我復(fù)制。
具有標(biāo)記基因。是為了方便篩選出導(dǎo)入了目的基因的細(xì)胞，標(biāo)記基因一般是抗生素的抗性基因，導(dǎo)入了抗生素抗性基因（目的基因也一般在運(yùn)載體上）的細(xì)菌就能夠在含抗生素的培養(yǎng)基上存活。當(dāng)然有的時(shí)候，色素、熒光蛋白相關(guān)的基因也可以作為標(biāo)記基因，只不過沒有抗生素抗性基因方便罷了。
而如果要構(gòu)建表達(dá)載體的話，還要在目的基因的兩側(cè)添加啟動(dòng)子和終止子。
啟動(dòng)子是做什么的？RNA聚合酶識別、結(jié)合和驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。
