一起了解下泛素化抗體。

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圖1：不同類(lèi)型的泛素化

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我們都知道，抗體與許多問(wèn)題相關(guān)聯(lián)。在研究中，選擇合適的抗體至關(guān)重要！對(duì)于泛素抗體的選擇，我們需要注意哪些呢？

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天然或變性泛素？

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如果購(gòu)買(mǎi)的抗體是免疫天然泛素蛋白獲得的，那么需要確保蛋白樣本不會(huì)在測(cè)定過(guò)程中變性，否則會(huì)破壞信號(hào)。另一方面，泛素是難以變性的小球狀蛋白。如果它在SDS-PAGE步驟中沒(méi)有足夠變性，那么能識(shí)別變性泛素蛋白的抗體可能不會(huì)識(shí)別它。

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如果你正在尋找一種變性蛋白，你可以在一抗孵育之前，通過(guò)對(duì)PVDF膜進(jìn)行變性處理，增加WB信號(hào)強(qiáng)度。這種方法聽(tīng)起來(lái)似乎不靠譜，但確實(shí)是行得通的。具體操作如下：

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1.將印跡在沸水中孵育15-30分鐘；

2.20mM Tris-HCl，pH7.5，5mM?β-巰基乙醇和6M鹽酸胍溶液中4℃孵育30分鐘。

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單聚或多聚泛素？

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大多數(shù)泛素抗體可以結(jié)合單泛素鏈和多泛素鏈。能特異性識(shí)別多聚泛素鏈的抗體已經(jīng)問(wèn)世，但是似乎不能均等地識(shí)別不同的泛素鏈。一項(xiàng)研究表明，來(lái)自Dako的抗Ub抗體不識(shí)別多泛素鏈中的M1鏈及K48和K63鏈，而來(lái)自Cell Signaling Technology的抗Ub抗體幾乎不能識(shí)別M1鏈。顯然，如果目標(biāo)蛋白上的泛素鏈較少被識(shí)別，那么所得到的信號(hào)就會(huì)減少。

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如果你想檢查特定的多聚泛素鏈，很多已開(kāi)發(fā)的抗體都能滿(mǎn)足你的要求。抗K6，K11，K33，K48和K63都可以買(mǎi)到現(xiàn)貨，似乎已經(jīng)得到相當(dāng)不錯(cuò)的評(píng)論。 抗M1，K27和K29的抗體目前還不存在，你或許會(huì)成為開(kāi)發(fā)此類(lèi)抗體的第一人？

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如果你找不到合適的抗體或先前使用的抗體效果不理想，那么你可以使用特定的泛素結(jié)合域（ubiquitin binding domains）識(shí)別你感興趣的泛素化蛋白。ubiquitin binding domains 可固定用于下拉或用作探針。詳見(jiàn)：Optimising methods for the preservation, capture and identification of ubiquitin chains and ubiquitylated proteins by immunoblotting.（若不能打開(kāi)此鏈接，請(qǐng)留言索要原始文章）