NK-92細(xì)胞基本信息

　　細(xì)胞名稱：NK-92(人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞)

　　細(xì)胞別稱：NK92;Natural Killer-92;NK-92.05;Neukoplast;aNK

　　細(xì)胞貨號(hào)：SNL-405

　　生長(zhǎng)特性：懸浮

　　培養(yǎng)條件：MEMα+20%FBS+0.2mM Inositol+0.1mMβ-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/mL recombinant IL-2+1%P/S

　　培養(yǎng)環(huán)境：空氣，95%；二氧化碳(CO2)，5%；37℃

　　細(xì)胞簡(jiǎn)介：NK-92細(xì)胞是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細(xì)胞株。NK-92細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性，鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。NK-92細(xì)胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。NK-92細(xì)胞依賴于重組IL-2的存在，低至10U/mL的劑量足以維持增殖；在缺乏IL-2的情況下，細(xì)胞將在72小時(shí)內(nèi)死亡。ATCC通過PCR證實(shí)該細(xì)胞系Epstein-Barr病毒DNA序列呈陽性。NK-92細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、免疫學(xué)研究、毒理研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

　　NK-92細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

　　NK-92細(xì)胞呈聚團(tuán)懸浮生長(zhǎng)，細(xì)胞團(tuán)較大時(shí)需要吹打成小團(tuán)，防止團(tuán)塊中間的細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)不足而死亡。除非實(shí)驗(yàn)需要，不建議經(jīng)常將細(xì)胞吹散成單個(gè)細(xì)胞，否則細(xì)胞狀態(tài)將變差；

　　NK-92細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基和血清要求高，培養(yǎng)基嚴(yán)格按照配方配制，并且應(yīng)該使用優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)；

　　NK-92細(xì)胞對(duì)IL-2有依賴性，如果缺少IL-2細(xì)胞將很快死亡。需注意IL-2容易降解，若購買商品化完全培養(yǎng)基，要保存得當(dāng)并在保質(zhì)期內(nèi)盡快用完；若自己配制培養(yǎng)基，IL-2可以采用現(xiàn)配現(xiàn)用的方法；

　　建議常備IL-2，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)不佳時(shí)，額外向培養(yǎng)基中按200U/mL補(bǔ)充IL-2，可有效改善。

　　NK-92細(xì)胞對(duì)吹打等機(jī)械刺激敏感，不要吹打太多次，注意控制吹打力度輕柔；

　　NK-92細(xì)胞對(duì)溫度敏感，培養(yǎng)基、PBS需復(fù)溫至37℃再使用。

　　NK-92細(xì)胞凍存難度較大，建議使用90%FBS+10%DMSO凍存液，凍存密度推薦300萬細(xì)胞/毫升，不能過低。凍存液中不必加IL-2。凍存時(shí)細(xì)胞應(yīng)吹散成單細(xì)胞。

　　NK-92細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)算得的細(xì)胞的活率不能代表該細(xì)胞真實(shí)的狀態(tài)。因?yàn)榕囵B(yǎng)時(shí)存在一些散在的單細(xì)胞，這些細(xì)胞活性較低，且不能完全去除，導(dǎo)致在計(jì)數(shù)時(shí)細(xì)胞整體活率可能不高。細(xì)胞狀態(tài)可以通過細(xì)胞能否聚團(tuán)判斷：只要大部分細(xì)胞能聚團(tuán)生長(zhǎng)，細(xì)胞狀態(tài)就沒有問題。當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)不佳時(shí)，細(xì)胞無法順利聚團(tuán)。